CIP-4的剪接突變現(xiàn)象在腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用初探.pdf

1、目的：
　　 觀察TGF-β和低氧兩種方式誘導(dǎo)下的人近端腎小管上皮細(xì)胞（HKC）轉(zhuǎn)分化（EMT）過程中CIP-4(Cdc42-interacting protein-4)是否會發(fā)生剪接突變現(xiàn)象而產(chǎn)生CIP-4的剪接突變體CIP-4V。初步探討其對于EMT可能產(chǎn)生的機(jī)制和意義。并且通過重疊延伸PCR人工合成突變體CIP-4V，構(gòu)建其真核表達(dá)的質(zhì)粒pEGFP-C1-CIP-4V。
　　 方法：
　　 通過TGF-β和

2、低氧兩種方式刺激下培養(yǎng)HKC細(xì)胞，通過RT-PCR采用梯度凝膠電泳的檢測方法觀察其核酸水平CIP-4剪接突變現(xiàn)象的發(fā)生，通過Western blot的方法在蛋白質(zhì)分子水平檢測CIP-4剪接突變現(xiàn)象的發(fā)生。通過重疊延伸PCR人工合成突變體CIP-4V，構(gòu)建其真核表達(dá)的質(zhì)粒。
　　 結(jié)果：
　　 兩種不同的誘導(dǎo)方法，剪接突變現(xiàn)象不同，通過缺氧誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞檢測到了CIP-4的剪接突變體CIP-4V，而通過TGF-β未檢測到