miR-34a通過抑制HMGB1調節(jié)視網膜母細胞瘤自噬及化療效果的機制研究.pdf

1、中圖分類號UDC博士學位論文學校代碼j夠33miR一34a通過抑制HMGBl調節(jié)視網膜母細胞瘤自噬及化療效果的機制研究miR34aregulatesautophagyandchemotherapeuticresponseinretinoblastomacellsthroughrepressionofHMGBl作者姓名：劉可學科專業(yè)：臨床醫(yī)學研究方向：眼科學學院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導教師：段宣初教授論文答辯日期窒生蘭：登答辯委員會主席

2、中南大學二0一三年五月博士學位論文中文摘要摘要目的：探討miR34a能否通過HMGBl調控視網膜母細胞瘤細胞的凋亡及自噬，并增加DNA的損傷以提高化療藥物對視網膜母細胞瘤的治療效果。方法：培養(yǎng)人視網膜母細胞瘤細胞Y79及WeftRBl后分四部分完成本實驗研究。1miR34a調節(jié)RB細胞HMGBl的表達：Y79及WeriRB一1細胞轉染miR一34amimic或antagomir34a后，qRTPCR及Westemblotting分別檢測

3、HMGB1mRNA及蛋白表達水平改變，螢光素酶檢測分析HMGB13UTR報告基因活性改變。2miR34a通過調節(jié)HMGBl誘導凋亡并抑制自噬：Y79細胞轉染miR34amimic、HMGBlshRNA或同時轉染miR34a和pUNO1HMGB1cDNA72小時后Caspase3試劑盒及AnnexinV／FITC試劑盒檢測細胞凋亡及Caspase3活性，Westem—blotting分析cleaved—cap3及cleavedPARP蛋白

4、水平改變。Y79細胞轉染miR34amimic或HMGB1shRNA72小時后HBSS饑餓培養(yǎng)1小時，Western—blotting檢測LC3、p62及HMGBl蛋白水平改變，免疫熒光觀察并計數LC3點狀聚集改變，透射電鏡觀察并計數自噬空泡數量改變。3miR34a通過抑制自噬增強RB細胞對化療的敏感性：Y79細胞經長春新堿、依托泊苷或卡鉑處理48小時后Westernblotting檢測LC3及p62的蛋白水平。Y79細胞分別轉染miR