MicroRNA-143-145通過調控ErbB-3在乳腺癌中發(fā)揮抑癌作用.pdf

1、乳腺癌是在一種在全世界女性群體中高發(fā)的惡性腫瘤。已經(jīng)有許多文獻報道酪氨酸激酶受體家族在乳腺癌中的重要作用，目前研究較多的是該家族的ErbB-2基因，但是也有研究發(fā)現(xiàn)ErbB-3在乳腺癌中也具有重要作用。大量研究表明miRNA與乳腺癌細胞的增殖、凋亡、侵襲和轉移以及耐藥性等諸多生物學行為密切相關。因此，我們猜測在乳腺癌中有某種miRNA會通過調控ErbB-3基因來發(fā)揮抑癌作用。
　　MicroRNA（miRNA）是一種內源性的非編碼

2、小分子單鏈RNA，長度大約在22個核苷酸左右。miRNA通過與靶基因的mRNA分子3'端非編碼區(qū)域(3'-UTR)的種子序列(seed sequence)互補配對，使的靶基因的mRNA分子在翻譯水平受到抑制或特異性的對mRNA分子進行切割，從而可以在轉錄后水平上對靶基因的表達進行調控。
　　首先，我們通過大量的文獻檢索并進行結果分析發(fā)現(xiàn)ErbB-3基因在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，該基因對乳腺癌細胞的增殖、分化以及其對化

3、療藥物的敏感性都具有十分重要的影響。接下來我們對有報道過的在乳腺癌中發(fā)揮重要作用的miRNA進行檢索，并通過TargetScan、PicTar、miRnada等在線共享生物信息學軟件對檢索結果進行分析，我們發(fā)現(xiàn)miR-143以及miR-145極有可能通過調控ErbB-3基因在乳腺癌中發(fā)揮了極其重要的抑癌基因的作用;第二步，我們選擇了乳腺癌細胞系MCF-7作為實驗研究的對象。當miR-143以及miR-145在該細胞系中過表達時我們發(fā)現(xiàn)E

4、rbB-3的mRNA并未發(fā)生變化，但是其蛋白水平卻發(fā)生了明顯的下降，而當這兩種miRNA的表達水平被抑制時，mRNA同樣不發(fā)生變化，蛋白水平卻有了一定水平的升高;第三步，我們構建了含有ErbB-3基因3'-UTR的熒光素酶基因報告載體，通過熒光素酶基因報告實驗證明了miR-143以及miR-145是通過直接結合到ErbB-3的3'-UTR上來發(fā)揮對ErbB-3的調控作用的;第四步，我們發(fā)現(xiàn)miR-143以及miR-145通過調控ErbB

5、-3基因，從而對MCF-7細胞的增殖以及遷移發(fā)揮重要的影響;第五步，我們構建了含有miR-143以及miR-145表達基因的慢病毒載體，通過慢病毒感染MCF-7細胞，我們得到了穩(wěn)定的過表達miR-143以及miR-145的MCF-7細胞系，在該細胞系內，ErbB-3基因的mRNA同樣未發(fā)生變化，而蛋白水平相對于正常MCF-7表達降低。我們用該穩(wěn)轉細胞系以及未作處理的MCF-7細胞，通過轉染過表達質粒而高水平表達ErbB-3的MCF-7細

6、胞分為三組在C57小鼠腋下進行了植瘤。發(fā)現(xiàn)慢病毒感染過的細胞系所形成的腫瘤與普通MCF-7細胞形成的腫瘤比較體積縮小，重量明顯減輕。而高水平表達ErbB-3的MCF-7細胞形成的腫瘤組織在體積和重量上都有明顯升高。
　　通過以上實驗結果我們證明，原癌基因ErbB-3通過影響腫瘤細胞的增殖以及遷移能力在乳腺癌的形成發(fā)展過程中發(fā)揮著極其重要的促進作用。miR-143以及miR-145可以負向的調控ErbB-3基因在乳腺癌細胞中的表達水

7、平從而抑制乳腺癌細胞的增值以及遷移能力，因而在乳腺癌形成以及發(fā)展過程中發(fā)揮重要的腫瘤抑制因子的作用。
　　本次研究的意義在于通過研究乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用的miRNA以及其與癌基因ErbB-3之間的調控關系，我們加深了對miRNA在乳腺癌形成以及進展過程中所發(fā)揮的重要作用的認識，并且證實了ErbB-3作為癌基因在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色，可以作為乳腺癌治療的針對性靶點。而miRNA可能通過針對于該靶點在乳腺癌的