低氧誘導(dǎo)因子-1a受體的小干擾RNA對(duì)人脊髓星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的研究低氧誘導(dǎo)因子-lα(HIF-lα)受體的小干擾RNA對(duì)人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)凋亡的影響，小干擾RNA對(duì)HIF-lα的調(diào)控作用；探討腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及調(diào)控。 方法構(gòu)建靶向低氧誘導(dǎo)因子-lα(HIF-lα)受體的小干擾RNA(si RNA)真核表達(dá)載體pSUPER EGFPl。培養(yǎng)成熟的U25l細(xì)胞株隨機(jī)分成：①、載體(載體中轉(zhuǎn)染HIF-lα基因)缺氧組(U251在1％氧，無(wú)糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24

2、h和48h)；②、載體常氧組(U251在常氧，無(wú)糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；③、空載體(載體中未轉(zhuǎn)染HIF-lα基因)缺氧組(U251在1％氧，無(wú)糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；④、空載體常氧組(U25l在常氧，無(wú)糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；⑤、對(duì)照缺氧組(U25l在1％氧，無(wú)糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；⑥、對(duì)照常氧組(U251在常氧，無(wú)糖和血清

3、的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)。每一個(gè)樣品采用real time PCR測(cè)定HIF-lαmRNA表達(dá)水平；Western Blot和免疫組織化學(xué)測(cè)定：HIF-lα蛋白表達(dá)水平；光鏡和電鏡分別觀察細(xì)胞、細(xì)胞線粒體和足突改變；熒光顯微鏡觀察細(xì)胞熒光；MTT法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)。 結(jié)果①、載體缺氧組HIF-1α mRNA和蛋白表達(dá)水平較空載體缺氧組、對(duì)照缺氧組顯著降低(P均<0.05)，載體缺氧組HIF-1α mRNA和蛋白

4、表達(dá)隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減少；②、空載體缺氧組、對(duì)照缺氧組24h HIF-1αmRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高出常氧組(大約2倍多)。③、載體常氧組、空載體常氧組、對(duì)照常氧組HIF-lα mRNA和蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P均>0.05)，④、載體缺氧組細(xì)胞線粒體和足突較空載體缺氧組、對(duì)照缺氧組明顯腫脹、凋亡細(xì)胞明顯增加。 結(jié)論①、腫瘤細(xì)胞在缺氧時(shí)HIF-1α基因表達(dá)增加，細(xì)胞凋亡減少。提示HIF-1α參與缺氧細(xì)胞的凋亡過(guò)程，