從蛹蟲草栽培殘渣中提取分離蟲草素及其抑制腫瘤活性的研究.pdf

1、蟲草素即3’-脫氧腺苷，是蛹蟲草的活性成分之一。近50多年的研究發(fā)現(xiàn)蟲草素有抑制腫瘤、抗真菌和增強免疫力的作用，已引起各國科學(xué)研究的高度重視。本研究課題以蛹蟲草培養(yǎng)基殘基為原料，系統(tǒng)深入研究了蟲草素檢測方法、提取純化工藝、純度鑒定及蟲草素的抗腫瘤活性研究等。
　　 建立了蟲草素高效液相色譜法，色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=64055x-26.599，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9999，線性范圍為：0.01-0.1 mg/mL，精密度及穩(wěn)定性

2、實驗的RSD均小于1％。本法簡單快速，蟲草素能夠達到很好的分離效果。
　　 探索從培養(yǎng)基殘基中提取蟲草素的技術(shù)，優(yōu)化了蟲草素水提醇沉的工藝。得出最佳水提醇沉工藝條件：40℃提取4次，料液比為1:20，每次提取2 h。提取液濃縮到廢料量的2倍，添加3倍量乙醇，醇沉?xí)r間為9h。
　　 蟲草素水提液經(jīng)過乙醇除雜后，雜質(zhì)含量仍然很高，需要先對蟲草素提取液進行初步分離。通過對6種陽離子交換樹脂靜態(tài)吸附蟲草素的特性進行研究，最終選擇

3、JK006樹脂用于蟲草素的粗純化。對陽離子樹脂JK006進行熱力學(xué)特征研究，研究結(jié)果表明，在溫度298K～308 K和蟲草素質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，吸附過程符合Freundlich吸附等溫方程。熱力學(xué)參數(shù)焓變△H>0，自由能變△G<0，JK006樹脂對蟲草素的吸附是吸熱過程，反應(yīng)是自發(fā)進行的。
　　 影響陽離子樹脂JK006動態(tài)吸附解吸的因素有流速、吸附液濃度、解吸液濃度等，吸附柱最佳工作條件：流速3 BV/h，吸附液濃度1.69 mg

4、/mL。解吸液為0.25 mol/L的氨水，解吸流速2 BV/h.。
　　 經(jīng)過陽離子樹脂JK006的初步純化后，采用717陰離子樹脂進一步純化，得到純度為96.4％蟲草素晶體。用TLC法、HPLC法、紫外光譜、紅外光譜等對獲得的蟲草素進行定性定量鑒定，確定其與標(biāo)準(zhǔn)品為同一種物質(zhì)。
　　 以白血病細(xì)胞K562為陽性對照，研究了不同濃度的自制蟲草素對小鼠肝癌H22細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果表明，蟲草素對K562細(xì)胞和H22細(xì)