香茹多糖注射制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的系統(tǒng)化研究.pdf

1、香菇多糖是菌類多糖中的一種。1985年日本最先批準(zhǔn)香菇多糖作為抗癌新藥上市，主要用于惡性腫瘤的輔助治療。研究表明香菇多糖在抗胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌等方面有良好的療效，能夠延長(zhǎng)腫瘤患者的存活時(shí)間。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)香菇多糖還有抗病毒和抗感染的功能。1995年，我國(guó)國(guó)產(chǎn)的香菇多糖注射制劑批準(zhǔn)進(jìn)入臨床應(yīng)用。現(xiàn)在市場(chǎng)上銷售的國(guó)產(chǎn)香菇多糖注射制劑包括注射液與注射用無(wú)菌粉末兩種。香菇多糖注射液全國(guó)有1個(gè)企業(yè)生產(chǎn)，2個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)(分別為中藥與化藥注射液)，

2、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為WS3-149(Z-29)-95(Z)和WS-1071(X-806)-2002；注射用香菇多糖，全國(guó)共4個(gè)企業(yè)生產(chǎn)、4個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為WS1-(X-152)-2004Z。原料藥名稱相同生產(chǎn)的注射劑卻執(zhí)行不同的標(biāo)準(zhǔn)，有的按照中藥管理，有的按照化藥管理，可控性差，加之現(xiàn)行的香菇多糖注射制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)執(zhí)行多年，檢查項(xiàng)目較少，部分分析方法陳舊，因此有必要通過(guò)改進(jìn)檢驗(yàn)方法和增加檢驗(yàn)項(xiàng)目，建立更加完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保安全、有效、穩(wěn)

3、定、可控的香菇多糖注射制劑用于臨床。
　　 本文根據(jù)《中國(guó)藥典》和相關(guān)文獻(xiàn)，以色譜技術(shù)為主要研究手段，對(duì)香菇多糖注射制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)化研究。
　　 一、現(xiàn)行香菇多糖注射制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定方法的改進(jìn)
　　 現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，香菇多糖注射液(中藥)和注射用香菇多糖的含量測(cè)定方法是滴定法。本文采用操作簡(jiǎn)便，誤差更小的蒽酮比色法作為香菇多糖注射液(中藥)和注射用香菇多糖的含量測(cè)定方法；本文還研究了用HPLC-R

4、ID來(lái)測(cè)定制劑中香菇多糖的含量，該法雖然可以避免香菇多糖注射制劑中輔料的干擾，但因現(xiàn)階段沒(méi)有香菇多糖的標(biāo)準(zhǔn)品，使用葡聚糖作為標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)進(jìn)行含量測(cè)定有一定誤差。
　　 二、現(xiàn)行香菇多糖注射制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)外項(xiàng)目的研究
　　 (1)現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺少對(duì)香菇多糖分子量的檢查項(xiàng)目，而研究表明[1，2]，香菇多糖的抗腫瘤活性與其分子量密切相關(guān)。本文采用HPLC-RID對(duì)香菇多糖注射制劑的分子量分布進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，香菇多糖注射制劑的

5、分子量分布差別很大。
　　 (2)多糖的單糖組成分析是研究多糖結(jié)構(gòu)、活性及構(gòu)效關(guān)系的一項(xiàng)重要內(nèi)容。本文采用HPLC-RID測(cè)定香菇多糖水解后的單糖組成，結(jié)果表明，不同制劑的香菇多糖單糖組成差別較大。
　　 (3)根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版二部附錄ⅧP，香菇多糖原料的生產(chǎn)純化過(guò)程中用到的三氯甲烷(第二類溶劑)、正丁醇(第三類溶劑)和乙醇(第三類溶劑)殘留量超標(biāo)會(huì)對(duì)人體造成危害。本文采用GC對(duì)香菇多糖注射制劑中溶劑殘留的含量

6、進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，香菇多糖注射制劑中未檢出殘留溶劑。
　　 (4)苯甲醇常在注射液中用作止痛劑和防腐劑，但如果攝入過(guò)量有溶血等副作用，會(huì)對(duì)人體造成危害。香菇多糖注射制劑中只有香菇多糖注射液(中藥)處方中含有苯甲醇。本文采用HPLC-DAD測(cè)定了香菇多糖注射制劑中苯甲醇的含量，結(jié)果表明，只有香菇多糖注射液(中藥)中檢測(cè)到苯甲醇并確定了含量限度范圍。
　　 (5)香菇多糖是由葡萄糖等單糖聚合而成的多糖，在水中難溶，注射液生

7、產(chǎn)時(shí)常需加入增溶劑。5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在制備過(guò)程中經(jīng)高壓滅菌后分解產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，會(huì)對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害；吐溫80是注射液常用的增溶劑，但具有很強(qiáng)的刺激性、溶血性和致敏性，本文采用HPLC-UV對(duì)香菇多糖注射制劑中5-HMF、吐溫80進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，香菇多糖注射制劑中未檢測(cè)到5-HMF和吐溫80。
　　 (6)根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版(附錄ⅨG)，處方中添加了滲透壓調(diào)節(jié)劑的制劑，均應(yīng)控制其滲透壓摩爾

8、濃度。本文采用冰點(diǎn)下降法對(duì)香菇多糖注射制劑的摩爾滲透壓進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，不同香菇多糖注射制劑的摩爾滲透壓有差異。
　　 (7)研究表明，重金屬及有害元素?cái)z入過(guò)多對(duì)人有危害，而藥品原材料、輔料及生產(chǎn)設(shè)備中的重金屬元素可能進(jìn)入到注射制劑中，因此有必要限制對(duì)制劑的重金屬元素的含量。本文采用ICP-MS測(cè)定香菇多糖注射制劑中多種金屬元素的含量，并制定了香菇多糖注射制劑中的重金屬及有害元素含量限度標(biāo)準(zhǔn)。
　　 三、腹腔內(nèi)注射香菇

9、多糖注射制劑對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)功能的影響
　　 單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)在免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，對(duì)機(jī)體內(nèi)異體顆粒、病原體及腫瘤細(xì)胞等具有強(qiáng)大而迅速的非特異性吞噬廓清能力，而研究發(fā)現(xiàn)香菇多糖的免疫調(diào)節(jié)功能與分子量大小有關(guān)，因此測(cè)定單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能可以表征香菇多糖的藥理活性。本文通過(guò)比較小鼠給藥后碳粒廓清功能強(qiáng)弱，反映了香菇多糖注射制劑對(duì)單核巨噬細(xì)胞功能的影響大小，結(jié)果顯示，分子量88萬(wàn)Da的注射用香菇多糖的免疫調(diào)節(jié)功能強(qiáng)于分子量32萬(wàn)Da