整合素靶向性納米磁性對(duì)比劑體外顯像人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，由于起病隱匿，目前尚缺乏有效的早期診斷方法，確診時(shí)往往已到晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此肝癌的早期診斷對(duì)患者的治療及預(yù)后有重要意義。近年來，探索惡性腫瘤早期診斷策略的過程中，靶向診斷尤其是分子影像技術(shù)備受重視。在分子影像實(shí)施過程中，較為關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于成像靶點(diǎn)的選擇和高效特異性分子探針的合成。αvβ3整合素受體等在正常肝細(xì)胞中檢測(cè)不出，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌

2、變時(shí)，細(xì)胞表面的αvβ3整合素受體會(huì)有較大改變；環(huán)狀RGD多肽是一種含有精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)和天冬氨酸(aspartic acid)序列的小肽，可以特異性識(shí)別整合素αvβ3受體。cRGD/αvβ3的靶向投遞系統(tǒng)在分子成像研究中備受關(guān)注。本文擬構(gòu)建 cRGDfK-SPIO靶向性探針，并探討其在αvβ3整合素受體表達(dá)陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞的分子靶向診斷中的價(jià)值及意義。
　　目的:構(gòu)建環(huán)狀精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸

3、多肽(cRGDfK)超順磁氧化鐵納米磁共振分子探針，以顯示高表達(dá)整合素αvβ3受體的人肝癌 HepG2細(xì)胞。
　　方法:1、用生物相容性多孔聚合SPIO微球（BIO-r-C-d）的羧基端與cRGDfK的氨基端化學(xué)偶聯(lián)，應(yīng)用激光納米粒度儀測(cè)試空白對(duì)比劑及多肽對(duì)比劑的粒徑及zeta電位；應(yīng)用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳及磁共振掃描儀檢測(cè)抗體對(duì)比劑的生化及磁學(xué)特性；2、用免疫熒光化學(xué)方法檢測(cè) HepG2細(xì)胞αVβ3整合素受體表達(dá)情況

4、；將 cRGDfK-SPIO、SPIO分別與HepG2細(xì)胞孵育，行普魯士藍(lán)染色顯示鐵顆粒；3、肝癌細(xì)胞在含有0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml不同濃度cRGDfK-SPIO對(duì)比劑的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后行磁共振成像，找出最佳成像濃度；4、細(xì)胞在37℃，最佳成像濃度的cRGDfK-SPIO對(duì)比劑組，SPIO組，及空白細(xì)胞對(duì)照組分別孵育24h后進(jìn)行磁共振掃描。
　　結(jié)果:1、

5、激光納米粒度儀，十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分析證明SPIO與cRGDfK多肽有效結(jié)合在一起，多肽對(duì)比劑的活性及弛豫率未發(fā)生明顯變化；2、免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)HepG2細(xì)胞中αvβ3整合素受體高度表達(dá)；普魯士藍(lán)染色法證明多肽對(duì)比劑可與 HepG2細(xì)胞結(jié)合。3、肝癌細(xì)胞在不同濃度cRGDfK-SPIO對(duì)比劑中培養(yǎng)24h后，各組之間的T2弛豫時(shí)間數(shù)值行方差分析，F(xiàn)值為336.389（P<0.01），然后，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組行Dunnett-t

6、檢驗(yàn)，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且20μg/ml組T2弛豫時(shí)間最低。4、20μg/ml鐵濃度的cRGDfK-SPIO與 HepG2細(xì)胞孵育后T2弛豫時(shí)間下降至261.3ms，SPIO組和對(duì)照組T2弛豫時(shí)間無明顯下降。
　　結(jié)論:cRGDfK-SPIO對(duì)αvβ3整合素受體具有較好靶向作用，可通過MRI顯示高表達(dá)整合素αvβ3受體 HepG2細(xì)胞。本研究所制備的cRGDfK-SPIO對(duì)比劑在HepG2細(xì)胞的最佳成像濃度是20