BMP2誘導(dǎo)豚鼠MSCs分化成骨細(xì)胞制備組織工程人工聽骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）與納米羥基磷灰石（nHA）材料體外復(fù)合培養(yǎng)的結(jié)合程度，并分析其構(gòu)建組織工程人工聽骨的可行性。
　　 方法：①采用細(xì)胞差速貼壁法分離培養(yǎng)、純化豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD29、CD45、CD44進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物鑒定。采用骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP2）將第三代的MSCs誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞；倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，誘導(dǎo)后免疫組化染色和成骨誘導(dǎo)并檢測(cè)其成骨細(xì)胞分化

2、能力；②將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與納米羥基磷灰石共培養(yǎng)1天，3天，5天，7天，10天，電鏡觀察體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與此種支架材料的復(fù)合情況；③將復(fù)合培養(yǎng)5天的支架材料植入豚鼠聽泡模型，分別在2周、4周、8周、10周、12周取出組織工程人工聽骨進(jìn)行病理學(xué)觀察及掃描電鏡觀察材料的成骨能力。
　　 結(jié)果：⑴細(xì)胞培養(yǎng)的檢測(cè)：①M(fèi)SCs的檢測(cè)：第三代的MSCs形態(tài)均一，呈單層生長(zhǎng)，細(xì)胞多為長(zhǎng)梭形，呈旋渦狀排列；其表面標(biāo)記物CD29、CD4

3、4和CD45表達(dá)分別為95.7%、70%、0.7%；②成骨細(xì)胞檢測(cè)：誘導(dǎo)后倒置顯微鏡下可見細(xì)胞具有成骨細(xì)胞形態(tài)特征；免疫組化I型膠原檢測(cè)可觀察到細(xì)胞內(nèi)有黃褐色顆粒沉淀，堿性磷酸酶染色見細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)紫色顆粒，茜素紅染色時(shí)可見被染成紅色的誘導(dǎo)成骨細(xì)胞形成的鈣結(jié)節(jié)；⑵體外復(fù)合培養(yǎng)3天后，可見大量骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼附在材料表層，并且形態(tài)穩(wěn)定，生長(zhǎng)旺盛，增殖力強(qiáng)，具有極佳的延伸性；培養(yǎng)5天后可見材料表面已全部覆蓋骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)合緊密

4、，細(xì)胞表面可見大量分泌顆粒，胞體明顯增大，邊緣完整，呈纖維樣伸長(zhǎng)；7天后細(xì)胞逐漸從材料表面脫落，仍附在材料表面的細(xì)胞出現(xiàn)“星形”改變，“偽足”增多；10天后細(xì)胞呈片狀脫落；⑶病理學(xué)觀察到回植10周后的組織工程人工聽骨被大量纖維結(jié)締組織包裹，與周圍組織相融合；回植12周的人工聽骨能譜分析及掃描電鏡觀察可見材料表面形成了骨陷窩，微量元素含量測(cè)定與正常骨組織幾乎相同。
　　 結(jié)論：說(shuō)明納米羥基磷灰石材料保持了它良好的生物相容性，利于細(xì)