丙泊酚對(duì)糖尿病模型Goto-Kakizaki大鼠海馬組織影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：隨著社會(huì)的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)的日益進(jìn)步，人們的生活方式發(fā)生了重大的變化，人口結(jié)構(gòu)老齡化成為許多發(fā)達(dá)和發(fā)展中國(guó)家面臨的重要問(wèn)題。得益于外科和麻醉技術(shù)的發(fā)展，接受手術(shù)的老年病人日漸增多，許多老年病人并存的一系列疾?。ㄈ缧哪X血管疾病、內(nèi)分泌代謝疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤等）對(duì)病人的管理提出了更高的要求，也產(chǎn)生了許多新的醫(yī)學(xué)問(wèn)題。術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperative cognitive dysfunction，POCD）是麻醉和術(shù)后出現(xiàn)

2、的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system, CNS）并發(fā)癥，其臨床表現(xiàn)為認(rèn)知能力減退、焦慮、記憶受損、語(yǔ)言理解能力和社會(huì)融合能力減退等。在老年手術(shù)病人中十分常見(jiàn)，多發(fā)生在術(shù)后1-3天，可持續(xù)數(shù)天或數(shù)月，甚至發(fā)生永久性認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量，常導(dǎo)致病死率增加、康復(fù)延遲、喪失獨(dú)立生活的能力、其他并發(fā)癥增多、住院時(shí)間延長(zhǎng)和醫(yī)療費(fèi)用的增加等。目前POCD的病因不是很清楚，研究表明與患者年齡、使用藥物、麻醉方

3、法、手術(shù)方式、基礎(chǔ)疾病、基因型等因素有關(guān)。蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)技術(shù)是后基因組時(shí)代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù),它可以分析一個(gè)細(xì)胞、組織甚至生物體一套完整的蛋白質(zhì)表達(dá)情況。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在認(rèn)知功能領(lǐng)域的應(yīng)用非常廣泛，國(guó)內(nèi)外很多文獻(xiàn)報(bào)道了其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease,AD）、酒精性腦病、亨廷頓?。℉untington disease,HD）性癡呆、帕金森?。≒arkinson disease,PD）

4、等的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)了一系列與上述疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)，為診斷和治療以及新藥研發(fā)提供了客觀的依據(jù)。本研究擬用蛋白質(zhì)組學(xué)方法技術(shù)，觀察臨床最常見(jiàn)的靜脈麻醉藥物丙泊酚（propofol）對(duì)經(jīng)典糖尿病模型—Goto-Kakizaki(GK)大鼠海馬組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，并利用Morris水迷宮（Morris Water Maze,MWM）觀察丙泊酚對(duì)模型大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的影響，探討丙泊酚對(duì)糖尿病大鼠認(rèn)知功能影響的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法

5、：清潔級(jí)GK大鼠64只，體重270±10g，隨機(jī)分為蛋白質(zhì)組學(xué)組（P組，n=24）、水迷宮組（W組，n=20）、參數(shù)組（A組，n=5）和形態(tài)學(xué)組（M組，n=15）,P組分為P1和P2兩組,各12只,P1和P2組各分4個(gè)亞組，每個(gè)亞組3只，P1組和A組腹腔注射丙泊酚100mg/kg，在1h和2h后追加劑量50mg/kg，維持麻醉3小時(shí)，P2組同樣方法和劑量給予生理鹽水作為對(duì)照。P1組分別在麻醉結(jié)束后3h，24h，72h和1周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)在每

6、個(gè)亞組隨機(jī)選取3只大鼠取海馬組織，雙向電泳（SDS-PAGE）分離蛋白,圖像掃描，與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)P2組比較，選取4倍差異點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析。W組隨機(jī)分為W1和W2兩組，每組10只，W1組用上述方法給予丙泊酚維持麻醉3h，W2組給予生理鹽水作對(duì)照，在給藥后1-7天上午同一時(shí)間進(jìn)行水迷宮行為學(xué)測(cè)試，比較兩組逃避潛伏期（escape latency）和在各個(gè)象限停留的時(shí)間百分比，另觀察A組麻醉過(guò)程中0.5h、1.5h和2.5h血?dú)庾兓闆r。M組Ni

7、ssl染色法觀察給藥對(duì)海馬形態(tài)學(xué)影響。
　　 結(jié)果：與P2組相比，P1組麻醉后3h發(fā)現(xiàn)7個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào)，24h有3個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào)，72h有2個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào)，1周則出現(xiàn)2個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn)14個(gè)差異表達(dá)蛋白，涉及氧化還原、能量代謝、突觸信息傳遞、細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞變性凋亡等生物學(xué)過(guò)程。W組逃避潛伏期隨時(shí)間推移逐漸縮短，麻醉后第5天兩組逃避潛伏期比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，兩組間各