板藍(lán)根組酸結(jié)構(gòu)修飾及其衍生物抗腫瘤活性和定量構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、據(jù)2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》記載，板藍(lán)根是十字花科植物菘藍(lán)（Isatis indigotica Fort.）或者爵床科植物馬藍(lán)(Baphicacanthus cusiaBremek.)的干燥根。板藍(lán)根是最有影響的中藥之一。藥理學(xué)研究證明，板藍(lán)根具有抗病毒、抗菌、抗內(nèi)毒素和提高人體免疫功能等作用。
　　前期工作表明板藍(lán)根組酸在體內(nèi)外可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，在此基礎(chǔ)上本研究按照西方國(guó)家新藥研發(fā)的基本程序，將板藍(lán)根組酸選定為先導(dǎo)化合物

2、，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和改造。共合成了28個(gè)衍生物，進(jìn)行了體外活性篩選，建立了其抗腫瘤定量構(gòu)效關(guān)系(QSAR)方程式?；衔颙——N，N—二（2-氯乙基）—芥酸酰胺，又名N，N—二（2-氯乙基）—二十二碳-13—烯酸酰胺——被選定為藥物候選化合物，進(jìn)行腫瘤多藥耐藥(MDR)逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制的研究。通過(guò)考察化合物J的體內(nèi)外抗腫瘤活性、對(duì)腫瘤MDR的逆轉(zhuǎn)活性以及對(duì)其抗腫瘤機(jī)制和逆轉(zhuǎn)機(jī)制進(jìn)行初步的研究，為其進(jìn)入新藥臨床試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本

3、研究顯示，N，N-二(2-氯乙基)—二十二碳—13—烯酸酰胺（即化合物J）是一種新穎的、原料便宜、易合成、作用機(jī)制獨(dú)特的抗腫瘤藥物候選化合物。化合物J符合藥物候選化合物的要求，進(jìn)一步的研究仍在繼續(xù)。本研究的內(nèi)容如下:
　　一、板藍(lán)根飲片中板藍(lán)根組酸的提取分離工藝建議初探及市售中成藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中板藍(lán)根組酸含量初步測(cè)定
　　用單一溶劑石油醚代替混合溶劑二氯甲烷-95％乙醇(1∶1)和石油醚-乙酸乙酯完成板藍(lán)根飲片及市售中成藥

4、復(fù)方板藍(lán)根顆粒中板藍(lán)根組酸的提取和分離。
　　二、板藍(lán)根組酸衍生物的合成
　　依據(jù)毒性及抗腫瘤活性測(cè)試結(jié)果的指導(dǎo)，選用便宜易得的原料、簡(jiǎn)單易行的經(jīng)典反應(yīng)合成了28個(gè)衍生物，完成先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)優(yōu)化。
　　三、板藍(lán)根組酸衍生物微乳（納米乳）研究
　　制備了所有28個(gè)板藍(lán)根組酸衍生物的微乳（納米乳）液，并測(cè)定了其粒徑及分布。
　　四、板藍(lán)根組酸衍生物體外毒性及抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)——抗腫瘤藥物候選化合物的篩選

5、　　以紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)考察板藍(lán)根衍生物毒性。以薄層色譜—?dú)庀嗌V法測(cè)定人肝癌細(xì)胞BEL-7404中芥酸甲酯的含量。以形態(tài)學(xué)觀察、MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的衍生物對(duì)癌細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)和逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。探討板藍(lán)根合成衍生物的抗腫瘤活性，篩選出活性好、毒性低的抗腫瘤藥物候選化合物。
　　最終篩選獲得N，N—二（2-氯乙基）—二十二碳—13—烯酸酰胺（即化合物J）。
　　五、高級(jí)脂肪酸抗腫瘤定量構(gòu)效關(guān)系(QSAR)方程式的建立
　　

6、采用計(jì)算化學(xué)的方法建立了兩個(gè)高級(jí)脂肪酸抗腫瘤定量構(gòu)效關(guān)系(QSAR)方程式。
　　六、抗腫瘤藥物候選化合物J的抗腫瘤作用研究
　　1、體外試驗(yàn)
　　以紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)和對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(HuVEC)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)考察化合物J的毒性。以對(duì)逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞耐藥特性時(shí)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)的影響以及藥物敏感性考察化合物J體外抗腫瘤效應(yīng)。
　　結(jié)果顯示，化合物J在濃度低于100 mM/L時(shí)未增強(qiáng)紅細(xì)胞溶血效應(yīng)，在濃度0-400

7、μg/mL范圍內(nèi)對(duì)HuVEC的生存能力并無(wú)影響。化合物J可使CD44的表達(dá)水平降低。化合物J毒性極低并顯示出體外抗腫瘤活性。
　　2、體內(nèi)試驗(yàn)
　　測(cè)試了化合物J對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)。建立了S180移植腹水瘤小鼠荷瘤模型并分析J抗腫瘤作用的量效關(guān)系。
　　結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)連續(xù)14天的觀察，在4mg/只給藥量上，化合物J對(duì)昆明小鼠無(wú)毒副作用。化合物J明顯延長(zhǎng)對(duì)S180腹水瘤荷瘤小鼠的平均生存時(shí)間，生命延長(zhǎng)率為17％～37％