乙型肝炎病毒編碼蛋白HBx對人KCTD9基因的激活作用研究.pdf

1、重型肝炎是一種預(yù)后很差的疾病,我國以乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus)所致的重型肝炎為主(約占70％)。HBV所致重型肝炎的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜。目前研究認(rèn)為,重型肝炎發(fā)生發(fā)展的―啟動或制控點(diǎn)‖受病毒和宿主兩個方面的因素以及這兩方面相互作用的影響。就乙型肝炎病毒自身因素方面而言,乙型肝炎病毒編碼的病毒蛋白被認(rèn)為在HBV相關(guān)的肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中有著相當(dāng)重要的作用,并且可以調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)各類分子的表達(dá)以及影響著HBV的整個復(fù)制過程

2、等[1-3]。
　　人KCTD9基因位于人第8號染色體,其編碼蛋白屬于KCTD家族的一員。本實(shí)驗(yàn)室通過基因芯片對比重型乙型肝炎與慢性乙型肝炎輕度患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)的基因水平表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)重型乙型肝炎患者PBMC中KCTD9mRNA水平大大高于慢性乙型肝炎輕度患者[4-7]。
　　為探討HBV編碼蛋白是否對人KCTD9具有激活作用,設(shè)計(jì)了下列試驗(yàn)。最先我們探討乙型肝炎病毒編碼蛋白能否對人KCTD9基因有著明顯的調(diào)

3、控作用。構(gòu)建三種HBV編碼蛋白HBc、HBs和HBx的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx以及hKCTD9啟動子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒,把病毒蛋白表達(dá)質(zhì)粒與啟動子質(zhì)粒以及β半乳糖苷酶基因表達(dá)質(zhì)粒(β-Gal)共轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞系,研究HBV編碼蛋白是否對人KCTD9(hKCTD9)基因具有激活作用,并且明確何種病毒蛋白發(fā)揮活化基因的作用。通過檢測報(bào)告基因相對熒光素酶(Luciferase)值反映乙型肝炎病

4、毒編碼蛋白對hKCTD9基因的轉(zhuǎn)錄具有明顯激活作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HBV編碼的HBx蛋白能夠明顯激活hKCTD9基因啟動子的轉(zhuǎn)錄。
　　在HBV編碼HBx蛋白作用下,為研究參與激活hKCTD9基因的順式作用元件,接下來做了一系列基因啟動子的截短缺失試驗(yàn),成功構(gòu)建了一系列5‘端缺失、擁有同樣3‘端的hKCTD9基因啟動子熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,把上述質(zhì)粒分別與乙型肝炎病毒編碼的HBx蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染進(jìn)HepG2肝癌細(xì)胞中。研究結(jié)