酶聯(lián)免疫法檢測血清HBsAg的空白限、檢出限及定量限的建立與評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　探討酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg結(jié)果檢測限的問題,參考CLSIEP17-A文件，按照文件中的方法建立本實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的空白限(LOB)、檢出限(LOD)及定量限(LOQ)，與常規(guī)建立檢測限的方法進(jìn)行對(duì)比評(píng)價(jià)，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止弱陽性標(biāo)本的漏檢，為臨床實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg的檢測限的建立提供指導(dǎo)。
　　方法：
　　1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立收集HBsAg含量為0且HBsAb呈陰性的正常人血

2、清20例混勻，并用雅培公司I2000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測證實(shí)此混合血清HBsAg含量為0ug/L，將此標(biāo)本作為稀釋液備用。收集已經(jīng)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)后的機(jī)器檢測HBsAg含量為500ug/L的樣本倍比稀釋成濃度為25.000、10.000、5.000、2.500、1.250、0.630、0.310、0.100（單位ug/L）的低濃度樣本，進(jìn)行ELISA檢測，將檢測結(jié)果繪制成曲線圖。
　　2.空白限的建立收集正常人的血清12份，經(jīng)美國雅

3、培公司I2000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測得到HBsAg含量為0，對(duì)其進(jìn)行連續(xù)5天的日間檢測，對(duì)得出的結(jié)果根據(jù)其分布狀態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　3.檢出限的建立收集已明確HBsAg濃度的病人陽性血清，用正常人的血清將其稀釋成為系列低濃度的樣本，其理論濃度分別為0.100、0.200、0.300、0.400、0.500，單位為ug/L，介于預(yù)期檢測濃度的1～4倍，對(duì)這5個(gè)濃度的樣本進(jìn)行連續(xù)12天的日間檢測，對(duì)得出的結(jié)果根據(jù)其分布狀態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

4、分析。如果是正態(tài)分布則采用均值標(biāo)準(zhǔn)差描述，如果是非正態(tài)分布則采用百分位數(shù)進(jìn)行描述。
　　4.定量限的建立首先確立本實(shí)驗(yàn)室的總誤差目標(biāo)，計(jì)算LOD結(jié)果測試的總誤差，觀察其是否小于確定的本實(shí)驗(yàn)室的總誤差，如果是，則LOQ=LOD；如果不是，則選擇比LOD更高濃度的樣本進(jìn)行重復(fù)測定40次，計(jì)算新濃度水平的總誤差，直到新濃度水平的總誤差小于目標(biāo)總誤差。
　　結(jié)果：
　　參考CLSIEP17-A文件建立的本實(shí)驗(yàn)室的LOB、LOD