人類(lèi)SIRT1多克隆抗體制備及SIRT1基因在肝癌細(xì)胞株HepG2中作用的初步研究.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文人類(lèi)SIRT1多克隆抗體制備及SIRT1基因在肝癌細(xì)胞株HepG2中作用的初步研究姓名：郭明日申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：曾衛(wèi)民20090501碩士學(xué)位論文中文摘要2427mg／mL，共5mL；ELISA法測(cè)定獲得的多克隆抗體的效價(jià)達(dá)到1：6400，Westernblot檢測(cè)抗血清的特異性較好；RTPCR和Westernblot分析表明成功建立了穩(wěn)定表達(dá)SIRTl和穩(wěn)定干擾SIRTl的Hep

2、G2細(xì)胞株；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，SIRTl過(guò)表達(dá)和RNA干擾后均能抑制HepG2細(xì)胞凋亡，較轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞，差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)，SIRTl過(guò)表達(dá)可使細(xì)胞周期產(chǎn)生S期和G2期停滯現(xiàn)象，而SIRTl干擾后對(duì)細(xì)胞周期影響不明顯；RTPCR分析表明SIRTl過(guò)表達(dá)可使IRS2mRNA表達(dá)明顯增加，SIRTl經(jīng)RNA干擾表達(dá)下降后可使IRS2mRNA表達(dá)明顯減少，較轉(zhuǎn)染pBabe和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞，差異均具有顯著

3、性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。結(jié)論制備了兔抗人SIRTl多克隆抗體；成功建立了穩(wěn)定表達(dá)SIRTl和穩(wěn)定干擾SIRTl的HepG2細(xì)胞株；SIRTl過(guò)表達(dá)和干擾均可抑制HepG2細(xì)胞凋亡，SIRTl過(guò)表達(dá)可使細(xì)胞周期產(chǎn)生停滯現(xiàn)象，而SIRTl干擾對(duì)細(xì)胞周期影響不明顯；SIRTl表達(dá)水平與HepG2細(xì)胞中IRS2mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)。關(guān)鍵詞沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SII汀1)；原核表達(dá)；抗體制備；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；胰島素受體底物2(IRS2)；RNA