結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中抑癌基因ARHI的表達(dá)及生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的:明確抑癌基因ARHI在人結(jié)腸癌細(xì)胞株及組織標(biāo)本的表達(dá)情況,并統(tǒng)計分析其表達(dá)異常與結(jié)腸癌患者臨床病理特征之間的相關(guān)性;初步研究ARHI基因在結(jié)腸癌細(xì)胞中的功能,從而為更深入的研究和早期結(jié)腸癌的基因診斷及分子靶向治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　 材料方法:本研究通過收集腸癌石蠟標(biāo)本及培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞株,利用Western-blot、免疫組化等方法驗(yàn)證細(xì)胞及人體組織中ARHI基因的蛋白水平,同時利用體外培養(yǎng)建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ARHI-

2、siRNA和空載質(zhì)粒PU6的HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞株,通過CCK-8、劃痕試驗(yàn)、Transwell小室及流式細(xì)胞術(shù)等方法初步研究ARHI基因?qū)θ私Y(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響。
　　 結(jié)果:ARHI基因在人正常結(jié)腸組織標(biāo)本廣泛表達(dá),而在相應(yīng)的結(jié)腸癌癌旁組織標(biāo)本表達(dá)下調(diào)或缺失,通過半定量評分的方法統(tǒng)計比較分析后發(fā)現(xiàn)ARHI表達(dá)在兩組間存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001);對實(shí)驗(yàn)組49例結(jié)腸癌組織實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)AR

3、HI蛋白表達(dá)與腫瘤的分化程度及TNM分期有關(guān)(P＜0.05),而與患者的年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、大小、大體類型、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及神經(jīng)、脈管浸潤與否、是否伴有息肉均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。通過建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ARHI-siRNA基因的結(jié)腸癌細(xì)胞株,利用CCK-8、劃痕試驗(yàn)、Transwell及流式細(xì)胞分析等方法檢測表明,與轉(zhuǎn)染空載PU6質(zhì)粒的細(xì)胞相比,在人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ARHI基因干擾質(zhì)粒后細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及抗凋亡能力均明顯