MTDH-AEG-1為靶點的基因疫苗誘導免疫抑制前列腺癌的生長轉移及增強化療藥物紫杉醇敏感性的作用研究.pdf

1、研究目的：
　　(1)、通過該實驗來評估以MTDH/AEG-1為靶點的基因疫苗對小鼠免疫功能的影響。(2)、通過體內外實驗探討以MTDH/AEG-1為靶點的基因疫苗對小鼠前列腺癌的生長轉移及增強化療藥物紫杉醇敏感性的作用。
　　研究方法：
　　通過流式細胞儀檢測免疫后小鼠脾臟C D4+和C D8+T細胞亞群及采用CytoTox96Non-Radioactive CytotoxicityAssay試劑盒檢測細胞毒性T淋巴

2、細胞（CTL）反應。免疫預防模型：將C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks o ld）隨機分為三個實驗組（n=8），分別給予PBS、包含Pub-MTDH、Pub的減毒沙門氏菌（108cfu）灌胃飼服免疫；每周免疫一次，共免疫三次。最后一次免疫后一周，均在三組小鼠前列腺原位（左、右背側葉）接種105RM-1細胞來構建前列腺原位移植瘤模型，誘導自發(fā)盆腔、腹膜后淋巴結轉移；記錄各組小鼠腫瘤大小及盆腔、腹膜后淋巴結轉移數(shù)（以HE染色為準），

3、通過免疫組織化學方法檢測原位腫瘤中CD8+分子的表達情況、用Tunel試劑盒檢測腫瘤細胞凋亡情況。治療模型：將C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks o ld）隨機分為四個實驗組：Taxol、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH+Taxol（n=12），分別在各組小鼠腹部皮下接種105RM-1細胞，建立皮下移植瘤模型，之后各組小鼠分別在3、7、11天分別給予PBS、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH的DNA疫苗灌胃飼服

4、免疫三次，Taxol、Pub-MTDH+Taxol組小鼠分別在4、8、12天給予紫杉醇（20mg/kg）用生理鹽水稀釋后行腹腔注射；觀察皮下腫瘤生長情況，繪制腫瘤生長曲線圖、小鼠荷瘤生存曲線圖，27天時取下腫瘤比較大小及重量；通過Tune l法檢測腫瘤細胞凋亡情況、RT-PCR檢測皮下腫瘤組織中Bcl-2、Bax基因表達情況。
　　結果：
　　MTDH/AEG-1基因在RM-1細胞中高表達，而在小鼠正常組織中表達非常低。pU

5、b-MTDH/AEG-1DNA疫苗同對照組Pub、PBS組比較能顯著激發(fā)CD4+和CD8+T細胞及細胞毒性T淋巴細胞（CTL）反應；有效抑制RM-1原位前列腺癌生長（p＜0.001）及盆腔、腹膜后淋巴結轉移（p＜0.05）；能明顯增強原位腫瘤中CD8+分子的表達（p＜0.01），促進腫瘤細胞凋亡（p＜0.001）。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗與化療藥物紫杉醇聯(lián)合運用同單獨運用MTDH/AEG-1、紫杉醇、pUb治療組相比，能顯

6、著抑制RM-1皮下移植瘤生長（＊P<0.05）及有效延長荷瘤小鼠生存時間（＃P＜0.05），促使腫瘤組織中Bc l-2表達下調、Bax表達上調而促進腫瘤細胞凋亡。
　　結論：
　　以MTDH/AEG-1為靶點的基因疫苗能有效抑制小鼠前列腺癌的生長轉移及增強化療藥物紫杉醇的敏感性。MTDH/AEG-1DNA疫苗與化療藥物紫杉醇聯(lián)合運用在前列腺癌的治療中顯示出了良好的優(yōu)越性，期待該基因疫苗還能更好地與外科手術、放射治療等聯(lián)合運用