基于改進的酵母雙雜交技術平臺研究HBX與人肝蛋白的相互作用.pdf

1、乙型肝炎病毒是嚴重威脅人類健康的一種病毒，特別是對于我國來說。乙型肝炎病毒的X基因只有154個氨基酸，但是它的功能十分復雜。其對人肝細胞有短期和長期的影響。了解HBX與肝細胞相互作用的結果是研究該疾病發(fā)生的生理和分子機制的基礎。本論文利用改進的酵母雙雜交技術平臺來研究HBX蛋白質與寄主蛋白的相互作用，其內容主要有以下幾個方面：
　　 (1)酵母雙雜交誘餌載體pDBleu-X的構建。最初的雙雜交系統(tǒng)是invitrogen公司的PR

2、OQUSTTM Two-hybrid system，后經(jīng)實驗室改造在誘餌pDBLeu載體插入一個帶有強啟動子Prrn的GFP作為反選擇標記。通過無酶克隆的方式將HBX基因裝入pDBleu中。
　　 (2)構建5×cDNA有限文庫，并且鑒定文庫的質量。
　　 (3)將pDBleu-X轉化Mav203后，進行自激活的檢測和3AT濃度的確定。利用改進的雙雜交系統(tǒng)，篩選人類肝臟cDNA文庫，對于篩選到的陽性克隆經(jīng)質粒拯救、經(jīng)過P