KLF6基因在舌癌細胞誘導(dǎo)分化過程中的作用研究.pdf

1、目的:從細胞分子水平初步了解KLF6(Kruppel-like factor6,Kruppel樣因子6)基因在舌癌細胞誘導(dǎo)分化過程中的作用及其可能機制,探討KLF6作為新的抗舌癌作用靶點的可行性。
　　方法:應(yīng)用誘導(dǎo)分化劑HMBA處理舌癌細胞TCA8113,觀察處理前后舌癌細胞的生長狀況和細胞形態(tài)的變化;運用RT-PCR檢測HMBA誘導(dǎo)前后KLF6 mRNA表達的變化;同時細胞爬片后,采用免疫組化技術(shù)檢測了解KLF6蛋白、p53、

2、c-Jun以及Cyclin D1表達的變化,綜合分析探討KLF6在舌癌發(fā)生與誘導(dǎo)分化過程中的作用及其可能機制。
　　結(jié)果:HMBA處理后貼壁細胞的數(shù)量隨濃度增加明顯減少;MTT實驗證實其對舌癌細胞的生長抑制作用呈濃度-時間效應(yīng)關(guān)系,隨著誘導(dǎo)劑濃度的增大、作用時間的延長,其抑制效應(yīng)逐漸增加;處理后舌癌細胞出現(xiàn)了一些向正常細胞形態(tài)逆轉(zhuǎn)演變的特征,比如:細胞外部形態(tài)趨向一致、體積增大比較明顯、細胞鋪展多;核漿比例變小,細胞核變小,核形狀

3、多為卵圓形,核仁數(shù)量明顯減少;細胞質(zhì)較為豐富,HE染色著色均勻一致等。應(yīng)用流式細胞儀檢測 HMBA處理組對人舌癌細胞周期分布的影響,檢測結(jié)果顯示,對照組人舌癌細胞Gl期細胞比例為52.0％,S期為34.0%,G2期為14.0%;5.0mmol/L HMBA處理TCA8113細胞后,隨誘導(dǎo)作用時間增加,G1期細胞數(shù)量增加,而S期細胞顯著減少,G2期細胞也減少且占細胞總數(shù)的比例不大,細胞明顯被阻滯于G1期(p<0.05);在流式細胞圖中也有

4、凋亡細胞峰出現(xiàn);RT-PCR結(jié)果提示HMBA處理后KLF6基因mRNA的表達顯著上調(diào)(p<0.05);應(yīng)用免疫細胞化學(xué)S-P方法檢測TCA8113人舌癌細胞在HMBA處理前后KLF6、p53、c-Jun及Cyclin D1蛋白表達的變化,顯示KLF6蛋白和p53在HMBA處理后表達顯著上調(diào)(p<0.05),而c-Jun和Cyclin D1則表達顯著下調(diào)(p<0.05)。
　　結(jié)論:HMBA對人舌癌細胞TCA8113具有抑制增殖、促

5、進分化和誘導(dǎo)凋亡的作用;探明了 HMBA對人舌癌細胞誘導(dǎo)分化處理可上調(diào) KLF6 mRNA,增加KLF6蛋白的表達,上調(diào)p53,下調(diào)c-Jun和Cyclin D1,其作用機理一方面可能通過p53上調(diào)p21的表達和活性,另一方面可能通過KLF6解除c-Jun對p21的抑制作用,下調(diào)Cyclin D1,抑制Cdk4/6和Cyclin D1復(fù)合物活性,將人舌癌細胞阻滯于GO/G1期,誘導(dǎo)人舌癌細胞向正常細胞分化,恢復(fù)正常細胞的表型和功能,并促