CTLA-4Ig融合蛋白對apoE（---）小鼠動脈粥樣硬化阻抑作用的研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是導致多種缺血性疾病最常見的原因，斑塊的不穩(wěn)定性是急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)等多種心腦血管疾病的病理生理基礎，免疫反應和炎癥機制共同參與了AS的發(fā)生發(fā)展[1]。近十年來，人們對動脈粥樣硬化和急性心腦血管事件的研究取得了顯著進展，并認識到炎癥免疫反應的重要意義。通過干預免疫過程來防治動脈粥樣硬化的途徑，現(xiàn)主要集中在免疫疫苗、免疫調節(jié)劑和細胞因

2、子、細胞表面阻斷劑的研究。CTLA-4Ig融合蛋白作為T淋巴細胞活化第二信號的阻斷劑，已經(jīng)引起研究者的關注，目前研究主要集中在移植免疫和自身免疫性疾病方面，在心血管領域方面的研究極少。為了探索預防和延緩AS發(fā)生發(fā)展的新途徑，我們觀察CTLA-4Ig對小鼠動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的阻抑作用，為心腦血管疾病的臨床治療開辟新途徑。 研究目的： 1.觀察CTLA-4Ig融合蛋白對載脂蛋白E基因缺陷小鼠(apoE-/-)動脈粥樣硬化病

3、變發(fā)生發(fā)展的抑制作用。 2.探討CTLA-4Ig融合蛋白抑制動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展可能的作用機制。 材料與方法： 1.實驗動物 10周齡apoE(-/-)小鼠，雄性，由北京大學醫(yī)學部實驗動物中心提供(合格證號：SCXK(京)21060008)，隨機處死兩只，取從主動脈根部至髂總動脈分叉處全長主動脈石蠟包埋后病理切片HE染色，鏡下見主動脈血管內膜光整，無動脈粥樣硬化病變。剩余小鼠高脂飲食適應性喂養(yǎng)4周，隨機處

4、死5只做為參照組，病理切片觀察主動脈已形成早期脂質條紋，余20只小鼠納入實驗，將動物按體重編號后，按隨機數(shù)字表分為CTLA-4Ig組、PBS組、IgG組及對照組，每組各5只。分別給予PBS(100 μ L/次)、Rat—IgG(10 μ g/次)、CTLA-4Ig(10 μ g/次)腹腔注射，2次/周，共8周。對照組無任何干預，同其余三組一起繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)8周。 2.實驗方法 實驗8周后，用1％戊巴比妥腹腔注射麻醉小鼠

5、，固定于解剖板上，打開胸腔、腹腔，分離自主動脈根部至髂動脈分叉處全長主動脈，用眼科鑷分離周圍脂肪組織及結締組織，將胸主動脈上半段切成3—4mm的動脈段，冰凍切片蘇丹Ⅲ染色，后將剩余主動脈放入10％福爾馬林固定后石蠟包埋連續(xù)切片，分別行HE染色，masson染色，以及a-actin免疫組織化學染色。采用IPP5.0圖象分析軟件比較各組問血管內膜厚度與中膜厚度之比，斑塊面積與管腔面積之比，斑塊內脂質浸潤程度，斑塊內膠原纖維以及平滑肌細胞的含

6、量。 3.數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析全部數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(Mean±Std．Deviation)表示，各組數(shù)據(jù)比較用單因素方籌分析(ANOVA)，不滿足方差齊性者用Welch檢驗。所有資料使用SPSS10.0統(tǒng)計學軟件進行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 1.血管內膜/中膜厚度之比：參照組顯著低于其余四組(P<0.01)，CTLA-4組顯著低于PBS組、IgG組及對照組(P<0.05)，PBS組、IgG組

7、及對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.斑塊面積/管腔面積之比：參照組顯著低于其余四組(P<0.01)，CTLA-4Ig組顯著低于PBS組、IgG組及對照組(P<0.01)，PBS組、IgC組及對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.斑塊內脂質浸潤程度：參照組顯著低于其余四組(P<0.05)，CTLA-4Ig組顯著低于PBS組、IgG組及對照組(P<0.05)，PBS組、IgG組及對照組之間差異無統(tǒng)

8、計學意義(P>0.05)。 4.斑塊內膠原含量：參照組masson染色很少有膠原表達，CTLA-4Ig組顯著高于PBS組、IgG組及對照組(P<0.05)，PBS組、IgG組及對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5.斑塊內平滑肌細胞含量：參照組斑塊內很少有平滑肌細胞表達，CTLA-4Ig組顯著高于PBS組、IgG組及對照組(P<0.05)，PBS組、IgG組及對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。