ERK1-2與Beclin-1蛋白在COPD大鼠模型骨骼肌萎縮中表達(dá)研究.pdf

1、目的：研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease，COPD)模型大鼠營(yíng)養(yǎng)不良骨骼肌細(xì)胞凋亡和ERK、Beclin-1的表達(dá)，探討ERK與Beclin-1是否參與調(diào)節(jié)COPD模型大鼠骨骼肌萎縮。
　　 方法：將100只健康Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為模型組80只，對(duì)照組20只。模型組采用1---29天，31---60天熏香煙，第30天氣管內(nèi)注入豬胰彈性蛋白酶(PEE20u/l00p

2、l)和熏香煙的方法建立COPD大鼠模型。對(duì)照組不熏香煙，在模型組氣管內(nèi)注入PEE的同一天采用同一術(shù)式在氣管內(nèi)注入等量注射用生理鹽水。再飼養(yǎng)至第90天，以低至對(duì)照組大鼠平均體重的10％作為判斷營(yíng)養(yǎng)不良的標(biāo)準(zhǔn)。予以肺功能檢測(cè)，評(píng)價(jià)模型，然后將實(shí)驗(yàn)大鼠分為：對(duì)照組、COPD體重正常組和COPD營(yíng)養(yǎng)不良組。處死全部大鼠，進(jìn)行如下測(cè)定：
　　 1、肺組織，左側(cè)趾長(zhǎng)伸肌標(biāo)本采集，
　　 2、測(cè)量大鼠體重與趾長(zhǎng)伸肌重量。
　　

3、 3、采用TUNEL原位雜交技術(shù)檢測(cè)趾長(zhǎng)伸肌細(xì)胞凋亡。
　　 4、采用免疫組化法（ABC法）測(cè)定骨骼肌ERK、Beclin-1蛋白質(zhì)表達(dá).
　　 5．采用Nikon DS高分辨率數(shù)碼像機(jī)經(jīng)NIS-Elements AR3.0軟件拍照。對(duì)骨骼肌組織切片均通過(guò)拍照收集陽(yáng)性細(xì)胞圖像。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用Ver.3.00程序軟件作圖像數(shù)字采集及定量分析。所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
　　 結(jié)果：
　　

4、 1．肺組織石蠟切片經(jīng)HE染色，光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)COPD模型組大鼠符合COPD的特征性病理改變。
　　 2.COPD模型組大鼠趾長(zhǎng)伸肌肌纖維明顯萎縮．
　　 3.COPD體重正常組體重及趾長(zhǎng)伸肌明顯低于對(duì)照組，COPD營(yíng)養(yǎng)不良組體重及趾長(zhǎng)伸肌明顯低于對(duì)照組和COPD體重正常組。
　　 4．COPD模型營(yíng)養(yǎng)不良組大鼠骨骼肌凋亡率明顯高于COPD體重正常組，且兩組COPD模型大鼠的骨骼肌凋亡率明顯高于對(duì)照組。