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1、抑癌基因RASSF2由于啟動子處DNA超甲基化而導(dǎo)致的基因沉默與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn),組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300能夠激活胃癌細胞SGC-7901細胞中RASSF2基因的表達并誘導(dǎo)細胞晚期凋亡,從而抑制細胞增殖。已知RASSF2基因?qū)毎鲋车囊种茩C制包括細胞凋亡和細胞周期停滯兩種途徑。而p300激活RASSF2對胃癌細胞周期的影響及作用機制目前還未見報道。
本論文中,通過集落形成實驗發(fā)現(xiàn)p300能夠抑制胃癌細胞H
2、GC-27的增殖,而該抑制作用可以被RASSF2的干涉質(zhì)粒部分逆轉(zhuǎn)。Western Blot檢測和RT-PCR結(jié)果證實,p300激活了HGC-27細胞中RASSF2基因的表達。這說明,在HGC-27細胞中,p300通過激活RASSF2抑制細胞增殖。
流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,過表達p300或抑制RASSF2表達都能誘導(dǎo)HGC-27細胞中S期細胞數(shù)明顯增加,而G2/M期細胞數(shù)明顯下降。而共轉(zhuǎn)染p300過表達質(zhì)粒與RASSF2siRNA
3、質(zhì)粒時,S期以及G2/M期的細胞數(shù)都恢復(fù)到了與對照組相近的水平。Western Blot結(jié)果表明,p300激活RASSF2基因表達能夠促進HGC-27細胞中p21的表達,以及磷酸化pRb對未被磷酸化 pRb蛋白表達的比例。同時p300激活RASSF2基因?qū)е铝姿峄痯38蛋白表達水平的下降。以上結(jié)果說明,p300通過激活RASSF2影響了HGC-27細胞周期相關(guān)因子的表達水平,誘導(dǎo)S/G2細胞周期停滯。
另外,染色質(zhì)免疫沉淀(C
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