鈉泵抑制介導的細胞死亡特征和機制研究.pdf

1、目的：本研究采用人臍靜脈內皮細胞ECV304為靶細胞，觀察鈉泵抑制劑哇巴因(ouabain)對細胞死亡、細胞連接、細胞內游離Ca<'2+>和活性氧自由基(ROS)的影響；檢測哇巴因作用細胞前后鈉泵α1亞單位、β1 亞單位、VE-cadherin和Snail基因表達的改變，探討鈉泵抑制介導的細胞死亡特征和作用機制。 方法： (1)MTT比色法檢測哇巴因對細胞的生長抑制作用。 (2)倒置光顯微鏡、透射電子顯微鏡觀察

2、細胞形態(tài)結構改變；Hoechst33342/PI雙熒光染色，熒光顯微鏡觀察細胞死亡特征，區(qū)分凋亡細胞與壞死細胞。 (3)激光共聚焦顯微鏡觀察血管內皮細胞內游離Ca<'2+>、活性氧自由基。 (4)瓊脂糖凝膠電泳分析凋亡細胞DNA片段。 (5)半定量RT-PCR.法檢測哇巴因對鈉泵α1和β1亞單位mRNA的表達以及VE-cadherin、Snail基因mRNA表達的影響。 結論： (1)哇巴因可明顯

3、抑制ECV304細胞的生長，抑制作用呈現(xiàn)濃度一時間依賴性。 (2)不同濃度哇巴因對血管內皮細胞的作用不同：高濃度可短時間引起細胞壞死，而低濃度可誘導細胞凋亡。 (3)哇巴因作用后細胞內Ca<'2+>濃度增加、氧自由基含量升高。 (4)哇巴因能濃度－時間依賴性上調鈉泵α1亞單位和Snail基因的表達、下調β1亞單位和VE-cadherin基因表達；β1亞單位和VE-cadherin表達共同降低，同時Snail抑制V