鉤體外膜蛋白編碼基因的克隆表達(dá)及其在不同致病株中的同源性分析.pdf

1、本文從問(wèn)號(hào)鉤體賴(lài)型賴(lài)株的全基因組序列中隨機(jī)挑選了11種預(yù)測(cè)的外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因作為候選疫苗所需的潛在抗原分子，進(jìn)行克隆和表達(dá)。用SDS-PAGE電泳和ELISA對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。表達(dá)產(chǎn)物純化后免疫新西蘭兔，獲得相應(yīng)抗血清。用ELISA和顯微凝集試驗(yàn)(MAT)分別測(cè)定了抗血清效價(jià)和抗體活性。另外，本文將培養(yǎng)的處于對(duì)數(shù)期的15種致病性鉤體的菌體蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，用獲得的各種抗外膜蛋白或相關(guān)蛋白兔抗血清作Immunoblo

2、t檢測(cè)，獲得各種外膜組分在不同致病性鉤體中的初步分布情況。通過(guò)RT-PCR和Immunoblot方法對(duì)15株致病性鉤體中這11種基因分別從基因和蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)。已經(jīng)完成的結(jié)果顯示在11種鉤體外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因中LA2295，LA2873和LA3138三種基因在致病性問(wèn)號(hào)鉤體賴(lài)型賴(lài)株都有表達(dá)。接著，根據(jù)問(wèn)號(hào)鉤體賴(lài)型賴(lài)株這三種外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因序列設(shè)計(jì)引物，本文以15種鉤體的基因組DNA為模板分別作PCR擴(kuò)增這三種外膜蛋白或相關(guān)蛋