Ginsenoside Rb1抑制由單純皰疹病毒1型感染導(dǎo)致的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖和凋亡異常.pdf

1、目的:
　　 1、建立人單純皰疹病毒I型(Herpessimplexvirus,HSV-1)感染人星形膠質(zhì)瘤細胞U251的模型。明確GinsenosideRb1(GRb1)對HSV-1感染導(dǎo)致的U251凋亡異常的干預(yù)效果并確定有效的藥物濃度;
　　 2、研究GRb1對HSV-1感染導(dǎo)致的U251細胞神經(jīng)營養(yǎng)素家族表達異常的抑制作用。
　　 材料和方法:
　　 1、以MOI(multiplicityofin

2、fection)等于5的HSV-1感染U251細胞建立感染模型。設(shè)立GRb1組、GRb1+HSV-1組、HSV-1組和對照組,倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)改變。采用MTT比色法檢測HSV-1感染后U251細胞增殖的變化;GuavaNexin(R)Reagent試劑盒流式細胞術(shù)檢測U251細胞凋亡比率的變化。
　　 2、設(shè)立GRb1(400μg/ml)組、GRb1+HSV-1(400μg/ml)組、HSV-1組和對照組,RT-PCR方

3、法檢測感染6h、12h、24h、36h和48hGRb1(400μg/ml)、GRb1+HSV-1(400μg/ml)組、HSV-1組和對照組NGFmRNA和BDNFmRNA的表達情況。Westernblot方法檢測12h、24h、36h和48h后各組NGF的蛋白表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、MTT法結(jié)果顯示HSV-1組MTT值始終低于對照組(P＜0.05),GRb1(400μg/ml)組各時間段MTT值均高于對照組

4、(p＜0.05)。GRbl+HSV-1(400μg/ml)組感染HSV-1后的各時間段MTT值均高于HSV-1組(P＜0.05)。對照組形態(tài)學(xué)觀察HSV-1組細胞感染12h后開始出現(xiàn)融合,24h融合增多,36h后出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)(CPE),GRb1+HSV-1(400μg/ml)組細胞感染24h后開始出現(xiàn)少量融合,36h后融合增多,但大部分細胞為正常形態(tài);流式細胞術(shù)顯示:GRb1+HSV-1(400μg/ml)組凋亡率在各時間段均低于H

5、SV-1組(P＜0.05)。
　　 2、RT-PCR結(jié)果顯示:GRb1(400μg/ml)組和Orbl+HSV-1(40μg/ml)組在感染HSV-1早期6h-12hNGFmRNA表達降低(P＜0.05),但在感染24h,36h,48h表達增高且分別明顯高于對照組和HSV-1組(P＜0.05)。但檢測BDNFmRNA在12h-48h各處理組之間無明顯差異。Westernblot結(jié)果顯示:GRb1+HSV-1(400μg/ml)組