IS201對(duì)GL15神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路FAK-ras-MAPK的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:人GL15神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞FAK-ras/MAPK信號(hào)通路是整合素αvβ3參與調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,在膠質(zhì)瘤細(xì)胞的眾多生物學(xué)行為中起關(guān)鍵作用。IS201為目前一種強(qiáng)力整合素αvβ3的拮抗劑,可特異性識(shí)別整合素 RGD序列并與之結(jié)合,從而通過干擾整合素對(duì)其介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)予以影響。本實(shí)驗(yàn)著重研究IS201作用于GL15膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面的整合素αvβ3后,對(duì)該細(xì)胞FAK-ras/MAPK信號(hào)通路中重要蛋白的表達(dá)量以及磷酸化的影響,從而在一

2、定程度上對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲予以抑制,為腫瘤細(xì)胞的治療提供幫助。
　　方法:(1)人工培養(yǎng)GL15神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,將不同濃度(0mg/L、20mg/L和40mg/L)的IS201加入DMEM培養(yǎng)液中。孵育16小時(shí)后收集樣品、裂解物。(2)Western Blotting實(shí)驗(yàn):將樣品行SDS-PAGE,電轉(zhuǎn)移于 PVDF膜上,封閉液室溫封閉,依次加入一抗(抗 FAK多克隆抗體1:1000稀釋;FAK磷酸化抗體1:1000;MMP-2抗體

3、1:1000稀釋;ERK1/2磷酸化抗體1:1000稀釋)和辣根過氧化酶標(biāo)記的羊抗兔二抗后顯影,肌動(dòng)蛋白作為蛋白質(zhì)上樣量的標(biāo)定。(3)建立Transwell模型板,培養(yǎng)12h,使細(xì)胞穿透 Matrigel膠和PET膜上的微孔,達(dá)到PET膜的下表面。然后細(xì)胞固定、染色和侵襲細(xì)胞數(shù)的計(jì)算。
　　結(jié)果:(1)不同濃度的IS201均可明顯抑制FAK的表達(dá)(*P<0.05)及FAK磷酸化(*P<0.05),并且隨著IS201濃度升高,其對(duì)F

4、AK表達(dá)及其磷酸化的抑制呈增高趨勢(shì)。(2)加入IS201的各實(shí)驗(yàn)組,ERK1/2的表達(dá)明顯降低(*P<0.05),隨著IS201濃度增加,其對(duì)ERK1/2表達(dá)的抑制呈增強(qiáng)的趨勢(shì)。(3)不同濃度IS201對(duì)MMP-2的表達(dá)均有明顯抑制作用(*P<0.05),隨著IS201濃度增加,其對(duì)MMP-2抑制作用呈增強(qiáng)趨勢(shì)。(4)不同濃度下IS201對(duì)GL15細(xì)胞侵襲性均有抑制作用,隨著IS201濃度增加,對(duì)其抑制作用呈增強(qiáng)趨勢(shì)。
　　結(jié)論: