Neuritin對(duì)Neuralized與Notch通路配體結(jié)合及Notch途徑下游靶基因的影響.pdf

1、目的:探討Neuritin對(duì)細(xì)胞中Neuralized與Notch通路的配體結(jié)合以及對(duì)Notch通路的受體及下游靶基因的影響,明確Neuritin通過(guò)Neuralized調(diào)節(jié)Notch通路的的機(jī)制。
　　方法:
　　(1)探討Neuritin是否通過(guò)對(duì)Neuralized的影響調(diào)節(jié)Notch通路配體Jag1:利用免疫熒光、免疫共沉淀以及Western-Blot技術(shù)觀察過(guò)表達(dá)Neuritin以及在RNA干擾下降低Neurali

2、zed后Jag1表達(dá)水平的變化;
　　(2)探討不同濃度Neuritin作用下Notch信號(hào)通路中Jag1與Neuralized結(jié)合量的變化:利用免疫共沉淀及Western-Blot首先確定各質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的最佳濃度以及Jag1與Neuralized結(jié)合的最佳時(shí)間,從而觀察不同濃度Neuritin作用下Notch信號(hào)通路中Jag1與Neuralized結(jié)合量的變化;
　　(3)探討Neuritin對(duì)細(xì)胞中Notch通路受體胞內(nèi)區(qū)(

3、NICD)、下游靶基因HES1蛋白表達(dá)水平的影響:利用免疫共沉淀及Western-Blot技術(shù)檢測(cè)在Neuritin作用下Notch信號(hào)通路受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)、下游靶基因HES1蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)利用免疫共沉淀以及Western-Blot技術(shù)檢測(cè)Neuritin過(guò)表達(dá)能增加細(xì)胞中Jag1表達(dá)水平;利用RNA干擾技術(shù)降低Neuralized表達(dá)后,細(xì)胞中Jag1的表達(dá)水平有明顯升高;
　　(

4、2)濃度梯度增加的Neuritin能使Notch配體Jag1表達(dá)呈梯度增加,并使Neuralized(酶)與Jag1(底物)的親和力逐漸降低;
　　(3)Neuritin在降低細(xì)胞中Neuralized與Jag1的親和力的同時(shí),降低了Notch受體胞內(nèi)區(qū),Notch途徑下游靶基因HES1的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　(1)Neuritin對(duì)Notch信號(hào)途徑配體Jag1的影響是受Neuralized介導(dǎo)的;
　　(2