Survivin反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)肝門部膽管癌細(xì)胞株FRH-0201侵襲作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 通過采用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸技術(shù)封閉凋亡抑制基因Survivin在肝門部膽管癌細(xì)胞株FRH-0201中的表達(dá)，觀察對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并通過細(xì)胞外分泌酶測(cè)定及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)研究該細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)前后侵襲能力的變化。探討以該基因?yàn)榘悬c(diǎn)對(duì)于肝門部膽管癌的治療意義及前景。
　　 方法：
　　 針對(duì)Survivin基因序列軟件設(shè)計(jì)并合成反義寡核苷酸，全程硫代修飾，采用陽離子脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染肝門

2、部膽管癌細(xì)胞株FRH-0201。首先分時(shí)段觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞增殖凋亡情況，記錄與正常培養(yǎng)組差異。第二步設(shè)置正義轉(zhuǎn)染組，反義轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組，取細(xì)胞上清培養(yǎng)液，離心后行酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，觀測(cè)各實(shí)驗(yàn)組MMP-2、TIMP-2的含量變化。第三步取各組細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞侵襲能力的變化。所有數(shù)據(jù)采用SAS9.1統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示。
　　 結(jié)果：
　　 1、Survivin反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)膽管癌

3、細(xì)胞凋亡作用的影響：Survivin反義轉(zhuǎn)染組細(xì)胞失去正常梭形樣細(xì)胞形態(tài)，胞體縮小呈近圓或橢圓形，胞漿減少，胞核深染，細(xì)胞核呈凋亡樣變化，可見核碎裂像，細(xì)胞間隙增大，貼壁性差，部分脫落于培養(yǎng)基中懸浮。正義轉(zhuǎn)染組細(xì)胞形態(tài)與空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)狹長(zhǎng)，輪廓清晰，胞核呈2-3個(gè)核仁表現(xiàn)。增殖情況優(yōu)秀，傳代及貼壁生長(zhǎng)情況好。
　　 2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞上清液MMP-2、TIMP-2:反義轉(zhuǎn)染組上清液MMP-2含量較正義轉(zhuǎn)染

4、組及空白對(duì)照組明顯減少（6l.32±2.21vs94..l5±3.32:61.32±2.21vsl00.45±5.86，P<0.05）：而反義轉(zhuǎn)染組上清液TIMP-2含量較正義轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組明顯增多(95.01±1.36vs58.21±4.42；95.01±1.36vs60.92±5.47, P　　 3、腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果：隨機(jī)選取五個(gè)視野觀察膽管癌細(xì)胞，并計(jì)數(shù)穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)目，空白對(duì)照組(46.3