JNK-P38 MAPK在人參皂苷Rb1-Rg1減輕Aβ-,25-35-誘導的胎鼠皮層神經(jīng)元tau蛋白過度磷酸化中的作用.pdf

1、目的：探討JNK/p38MAPK在β淀粉樣蛋白的多肽片段Aβ25-35(beta-amyloidpeptide25-35，Aβ25-35)誘導的擬阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)樣胎鼠皮層神經(jīng)元tau蛋白過度磷酸化中的作用及nNOS在Aβ25-35激活JNK/p38MAPK中的可能的機制；并在此基礎上進一步研究人參皂苷Rb1和Rg1減輕Aβ25-35誘導的胎鼠皮層神經(jīng)元tau蛋白過度磷酸化的作用及其可能機制。

2、 方法：選用孕期18±2d的清潔級SD(Sprague-Dawley，SD)大鼠，分離純化胎鼠皮層神經(jīng)元，選擇適宜濃度的凝聚態(tài)Aβ25-35，作用于皮層神經(jīng)元不同時間，應用蛋白免疫印跡和免疫細胞化學染色的方法，觀察tau蛋白磷酸化、總tau蛋白和JNK(c-junN-terminalkinase)/p38MAPK的表達情況，了解JNK/p38MAPK在Aβ25-35誘導的皮層神經(jīng)元tau蛋白過度磷酸化中的作用；并觀察nNOS的表達

3、情況。隨后用不同濃度的人參皂苷Rb1、Rg1或JNK/p38MAPK及NOS抑制劑預處理皮層神經(jīng)元24h后，再加入終濃度為20μmol/L凝聚態(tài)Aβ25-35，探討人參皂苷Rb1和Rg1是否能抑制JNK/p38MAPK的活性從而減輕tau蛋白磷酸化水平并進一步探討Aβ25-35能否通過nNOS途徑激活JNK/p38MAPK來誘導tau蛋白磷酸化。 結果：凝聚態(tài)Aβ25-35(20μmol/L)作用于皮層神經(jīng)元12小時，tau蛋白

4、Ser396、Ser199/202、Thr205位點的磷酸化水平明顯增高，總tau蛋白的變化趨勢與tau蛋白磷酸化的改變大體一致。同時JNK/p38MAPK的總量及其活性形式-磷酸化JNK/p38MAPK的蛋白表達水平也增加。用不同濃度的人參皂苷Rb1、Rg1或JNK/p38MAPK特異性抑制劑預處理24h后，可減輕Aβ所誘導的tau蛋白過度磷酸化，同時JNK/p38MAPK的總量及其活性形式磷酸化JNK/p38MAPK的蛋白表達水平也

5、下降，并且以10μmol/LRb1和40μmol/LRg1預處理后，對降低tau蛋白磷酸化水平和JNK/p38MAPK蛋白表達水平的作用最為明顯。使用NOS抑制劑后tau蛋白磷酸化水平及JNK/p38MAPK水平及活性形式p-JNK/p-p38MAPK水平均有下降。 結論：(1)JNK/p38MAPK是Aβ25-35誘導tau蛋白過度磷酸化的關鍵途徑，Aβ25-35可以通過激活JNK/p38MAPK從而使tau蛋白的磷酸化水平增