替米沙坦對兔髂動脈再狹窄模型連接蛋白Cx43表達的干預作用.pdf

1、目的：
　　本研究旨在通過建立兔髂動脈再狹窄模型，觀察髂動脈病理改變及連接蛋白43(Connexin43，Cx43)的表達情況及局部血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平變化，探腎素.血管緊張素系統(tǒng)(rennin-angiotensinsystem，RAS)與Cx在再狹窄發(fā)病過程中的可能的內(nèi)在聯(lián)系，進而對再狹窄機制做更進一步的探討。同時加用血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(angiotensinⅡconvertingenzy

2、meblockers，ARBs)進行干預，探討替米沙坦對兔髂動脈再狹窄模型連接蛋白43表達的干預作用及可能的再狹窄的防治作用。
　　研究方法：
　　1、制作二次球囊損傷髂動脈再狹窄模型：將30只新西蘭大白兔隨機分為正常對照組、再狹窄模型組、替米沙坦組。適應性喂養(yǎng)1周后再狹窄模型組和替米沙坦組行第一次球囊損傷，術后繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，4周后再狹窄模型組及替米沙坦組分別行第二次球囊損傷，術后繼續(xù)喂以高脂飼料，其中替米沙坦組于術后第

3、2天開始加用替米沙坦(5mg/kg·d)。4周后處死，處死前采血20ml，檢測血脂：膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)水平及血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平，處死后留取雙側髂動脈標本。
　　3、標本處理：所有標本均行HE染色及免疫組化染色；部分血管組織勻漿測定AngⅡ水平；部分血管組織勻漿用RT-PCR法對Cx43mRNA表達進行半定量測定。
　　結果：
　　1、血清學指標：再狹窄模型組與替米沙坦

4、組均較正常對照組CHO、TG水平升高(P<0.05)；但是，替米沙坦組血清膽CHO水平略低于再狹窄模型組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2、組織學變化：大體標本顯示正常對照組血管管壁為粉紅色，管壁薄，質地軟，HE染色可見內(nèi)膜主要成分為內(nèi)皮細胞(endothelialcells，ECs)與內(nèi)彈力板，中膜血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)排列整齊；再狹窄模型組髂動脈質地變硬，管

5、壁為白色，管壁增厚，管腔狹窄，HE染色見內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)含大量VSMCs，內(nèi)彈力板斷裂、不完整；中膜VSMCs增生，排列紊亂，可見突破內(nèi)彈力板向內(nèi)皮下遷移現(xiàn)象。替米沙坦組血管壁為粉白色，較再狹窄模型組質地軟、管腔增大，HE染色可見內(nèi)膜增厚，內(nèi)含大量VSMCs，內(nèi)彈力板連續(xù)、完整。再狹窄模型組及替米沙坦組經(jīng)免疫組化檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)，證實新生內(nèi)膜主要細胞成分為VSMCs。在40倍顯微鏡下測量三組新生內(nèi)膜厚度：與正常對照組

6、(2.8457±0.1860)μm相比，再狹窄模型組(266.1179±70.2696)μm、替米沙坦組(68.2233±24.3754)μm明顯增厚(P<0.01)；與再狹窄模型組相比，替米沙坦組內(nèi)膜厚度變薄(P<0.01)。免疫組化染色結果顯示三組均有Cx43表達。再狹窄模型組與替米沙坦組新生內(nèi)膜處有大量Cx43表達，較正常對照組明顯增強，且中膜VSMCs表達也較正常對照組明顯增強。替米沙坦組Cx43表達量較再狹窄模型組減弱。

7、>　　3、AngⅡ測定：與正常對照組相比，再狹窄模型組及替米沙坦組血管壁AngⅡ含量均增加(分別為P<0.05，P<0.01)，替米沙坦組AngⅡ水平較再狹窄模型組增加，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。三組間血漿AngⅡ水平無明顯差異(P>0.05)。
　　4、RT-PCR：與正常對照組及替米沙坦組比較，再狹窄模型組Cx43mRNA表達增加(P值均<0.01)；與正常對照組比較，替米沙組Cx43mRNA表達量增加，但無統(tǒng)計學差異(

8、P>0.05)
　　結論：
　　1、本研究通過高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合兔髂動脈二次球囊損傷成功建立再狹窄模型，結果穩(wěn)定、可重復性高。
　　2、再狹窄可能機制為：球囊損傷血管后，局部RAS激活，AngⅡ水平升高，通過血管緊張素Ⅱ1型受體(angiotensinⅡtype1receptor，AT1R)介導Cx43mRNA表達上調(diào)，引起細胞間信息、能量、物質交換增加，促進VSMCs增殖、遷移，形成以VSMCs為主要細胞組分的新生內(nèi)膜