ISS、Leri-Weill綜合征及Turner綜合征患者中SHOX基因-PAR1區(qū)異常的檢測(cè).pdf

1、背景和目的：人類生長(zhǎng)受環(huán)境、遺傳等諸多因素影響,與生長(zhǎng)相關(guān)的候選基因眾多,近年來(lái)發(fā)現(xiàn)矮小身材同源盒基因(SHOX)在生長(zhǎng)中起關(guān)鍵作用。在特發(fā)性矮小(ISS)患者中,SHOX基因突變發(fā)生率約在2—15％,在Leri-Weill綜合征患者中的發(fā)生率約為50-90％?；蜃儺愔饕蠸HOX基因/PAR1區(qū)缺失、錯(cuò)義或無(wú)義突變以及SHOX基因/PAR1區(qū)倍增三類。目前FDA與EMEA已批準(zhǔn)生人基因重組長(zhǎng)激素應(yīng)用于SHOX缺乏的矮小患者,并認(rèn)為生

2、長(zhǎng)激素對(duì)這類患者的治療效果與Turner綜合征患者相似。對(duì)于ISS患者及Leri—Weill綜合征患者從遺傳學(xué)層面進(jìn)行基因檢測(cè),有助于幫助臨床醫(yī)生診斷和制定治療方案,并可以預(yù)測(cè)治療效果。應(yīng)用于SHOX基因缺陷的檢測(cè)方法包括熒光原位雜交(FISH)、微衛(wèi)星分析、多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)和基因測(cè)序等,其中MLPA以其敏感、高效的特點(diǎn),被推薦為首選檢測(cè)方法。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)MLPA應(yīng)用于SHOX基因缺陷的研究尚屬空白,本實(shí)驗(yàn)針對(duì)SHOX基

3、因及其上下游部分序列的異常與矮小之間的關(guān)系進(jìn)行了探索,并對(duì)幾種檢查方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了比較。
　　 方法：提取ISS、Leri—Weill綜合征、疑診SHOX基因異常的未明確診斷患者、Turner綜合征、Klinefelter綜合征患者及健康人對(duì)照的全血DNA,對(duì)其進(jìn)行MLPA分析及基因測(cè)序,對(duì)于MLPA結(jié)果異?；颊哌M(jìn)行CASHOX、DXYS10092及DXYS10093微衛(wèi)星位點(diǎn)分析確證。
　　 結(jié)果：
　　 1

4、.基因測(cè)序:6名ISS患者及2名一級(jí)親屬中,共有5名ISS患者及1名一級(jí)親屬11個(gè)位點(diǎn)突變,突變率為83.3％。其中10個(gè)位點(diǎn)位于SHOX基因下游調(diào)控區(qū),1個(gè)位點(diǎn)位于SHOX基因上游調(diào)控區(qū)。21名Turner綜合征患者及2名一級(jí)親屬中,共有5人發(fā)現(xiàn)8個(gè)位點(diǎn)突變,突變率為23.8％。其中6個(gè)位于SHOX基因下游調(diào)控區(qū),1個(gè)位于SHOX基因上游調(diào)控區(qū),1個(gè)位于SHOX基因第三外顯子,突變導(dǎo)致第147位氨基酸由精氨酸變?yōu)樯彼帷?名未明確診斷

5、的可疑SHOX基因異常的患者中,共有6名患者發(fā)現(xiàn)8個(gè)位點(diǎn)突變,突變率為75％。其中1個(gè)是位于SHOX基因上游調(diào)控區(qū)的插入突變,其余均為位于SHOX基因下游調(diào)控區(qū)的點(diǎn)突變。
　　 2.MLPA分析:Leri—Weill綜合征患者中未發(fā)現(xiàn)異常。ISS患者中2例在PAR1區(qū)存在片段倍增。另1例X染色體存在大片段單倍缺失。ISS患者發(fā)生SHOX基因/PAR1區(qū)片段異常的比率為33.3％。未明確診斷患者中,1例在SHOX基因外顯子4—6a

6、及PAR1區(qū)存在片段倍增。未明確診斷患者中SHOX基因/PAR1區(qū)片段異常的比率為25％。而5例陽(yáng)性對(duì)照,位點(diǎn)倍增或缺失情況分別與其染色體核型分析結(jié)果相符。
　　 3.微衛(wèi)星分析:7個(gè)標(biāo)本共21個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)相符位點(diǎn)為14個(gè),使用微衛(wèi)星分析對(duì)MLPA分析結(jié)果進(jìn)行確證的相符率為66.7％。
　　 4.對(duì)1個(gè)ISS家系及1個(gè)Lori—Weill家系觀察SHOX基因突變位點(diǎn)的個(gè)數(shù)、SHOX基因/PAR1區(qū)片段倍增或缺失的范

7、圍與身材矮小的關(guān)系,并未發(fā)現(xiàn)兩者有線性相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)論：在進(jìn)行SHOX基因/PAR1區(qū)片段異常的檢測(cè)時(shí),MLPA的敏感性高于微衛(wèi)星技術(shù)。基因測(cè)序應(yīng)作為一項(xiàng)全面篩查ISS、Leri-Weill綜合征患者的技術(shù)。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SHOX基因調(diào)控區(qū)突變發(fā)生率高于編碼區(qū),但確認(rèn)新突變?nèi)孕柽M(jìn)一步進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)。SHOX基因/PAR1區(qū)片段倍增異常高于缺失異常,異常片段主要位于PAR1區(qū)。MLPA在Turner綜合征、Klinefelter