順鉑、SN-38對宮頸癌細胞增殖及凋亡的實驗研究.pdf

1、課題一 SN38抑制Akt途徑誘導宮頸癌細胞凋亡的實驗研究 目的：體外研究SN-38對宮頸癌細胞系HeLa和SiHa的細胞毒性及誘導其凋亡的機制。方法采用MTT法測定SN-38對Hela和SiHa細胞增殖的影響；流式細胞儀和Hochest33258檢測藥物作用前后的細胞凋亡情況；WesternBlot測定p53、p21、Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白水平的表達。結(jié)論SN-38抑制Hela和SiHA細胞生長呈時

2、效和量效關(guān)系；經(jīng)0.4μg/mlSN-38分別在12、24、36、48小時作用Hela和SiHa細胞，亞G1峰與對照組有顯著性差異；WesternBlot提示SN-38作用Hela和SiHa細胞后p53和p21蛋白水平表達逐步升高p-Akt蛋白水平表達逐漸降低，Bax、Bcl-2和Akt的表達無變化。轉(zhuǎn)染全長Akt1可減少SN-38對HeLa和SiHa細胞的細胞毒性。結(jié)果SN-38是通過p53介導的凋亡途徑及通過抑制Akt生存途徑殺傷腫

3、瘤細胞的。 課題二 順鉑誘導宮頸癌Hela細胞凋亡及其作用機制的研究 目的研究順鉑在體外誘導宮頸癌Hela細胞凋亡及其作用機制。方法采用MTT法測定順鉑對Hela細胞增殖的影響；流式細胞儀和Hochest33258檢測藥物作用前后的細胞凋亡情況；RT-PCR測定檢測HPVE6的mRNA水平表達；WesternBlot測定HPVE6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表達。結(jié)果順鉑抑制Hela細胞生長呈時

4、效和量效關(guān)系；經(jīng)10μg/ml順鉑分別在12、24、36、48小時作用Hela細胞，亞G1峰與對照組有顯著性差異；RT-PCR提示順鉑作用Hela細胞后HPVE6的mRNA水平表達逐漸降低；WesternBlot提示順鉑作用Hela細胞后HPVE6的蛋白水平表達逐漸降低，p53、p21和Bax蛋白水平表達逐步升高，Bcl-2的表達無變化。結(jié)論順鉑隨著藥物濃度和時間的增加對Hela細胞的體外抑制效應(yīng)增加。順鉑通過抑制HPVE6的表達，恢復(fù)

5、p53的功能，引起細胞凋亡，起到殺傷腫瘤的目的。 課題三 順鉑誘導宮頸癌Siha細胞周期阻滯及凋亡的研究 目的探討順鉑在體外對宮頸癌Siha細胞周期和凋亡的影響及其作用機制。 方法采用MTT法測定順鉑對Siha細胞增殖的影響；DNAladder和Hoechst33258檢測藥物作用前后的細胞凋亡情況；流式細胞儀檢測藥物作用前后的周期阻滯和凋亡。WesternBlot檢測E6、p53和p21的表達。

6、 結(jié)果順鉑抑制Siha細胞生長呈時效和量效關(guān)系；經(jīng)10μM順鉑分別在12、24、36、48小時作用Siha細胞，亞G1峰分別與對照組有顯著性差異；順鉑能使Siha細胞發(fā)生G2-M期阻滯，24小時達到最高，凋亡開始。Hoechst33258實驗組可見凋亡細胞；瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)DNA梯形條帶。WesternBlot提示順鉑作用Siha細胞后HPVE6的蛋白水平表達逐漸降低，p53和p21蛋白水平表達逐步升高。 結(jié)論順鉑隨著藥物濃度