人參皂苷Rg3對HT-29結(jié)腸癌細胞株MMP-9和TIMP-1表達的影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　研究人參皂苷Rg3對HT-29結(jié)腸癌細胞株基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）mRNA和組織金屬蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase1，TIMP-1）mRNA表達的影響及采用MTT法測定人參皂苷Rg3對HT-29結(jié)腸癌細胞的抑制率，從而探討人參皂苷Rg3抑制腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移的機制。
　　方法：
　　體外

2、培養(yǎng)人結(jié)腸癌細胞株HT-29細胞。用高劑量（100μg/ml）、中劑量（50μg/ml）和低劑量（25μg/ml）人參皂苷Rg3培養(yǎng)HT-29細胞24小時、48小時、72小時。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表達情況。采用MTT法檢測人參皂苷Rg3對腫瘤細胞的抑制率。統(tǒng)計采用SPSS14.0軟件包，兩因素析因方差分析，并多重比較。檢驗水準以P<0.05作為有顯著性差異，P<0.01

3、作為有非常顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR方法檢測Rg3對HT-29細胞MMP-9 mRNA表達的情況，方差分析，24小時組：對照組與低、中劑量組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05、P>0.05）,與高劑量組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）；48小時組：對照組與低、中、高劑量組相比均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05、P<0.01、P<0.01）；72小時組：對照組與低、中、高劑量組相比均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異

4、（P<0.01、P<0.01、P<0.01）。低劑量組：24小時組與48小時、72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01），48小時組與72小時組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；中、高劑量組：24小時組與48小時組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），24小時組、48小時組與72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01）。提示人參皂苷Rg3可以抑制HT-29細胞MMP-9 mRNA的表達，抑制作用

5、隨著劑量的增加及時間的延長而增強。
　　2.RT-PCR方法檢測Rg3對HT-29細胞TIMP-1 mRNA表達的情況，方差分析，24小時組：對照組與低劑量組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），與中、高劑量組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01）；48小時組和72小時組：對照組與低、中、高劑量組相比均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01、P<0.01）。低劑量組：24小時組與48小時組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（

6、P>0.05），24小時組與72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01），48小時組與72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；中、高劑量組：24小時組與48小時組、72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01），48小時組與72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。提示人參皂苷Rg3可以促進HT-29細胞TIMP-1 mRNA的表達，促進作用隨著劑量的增加及時間的延長而增強。
　　3.

7、MTT法檢測人參皂苷Rg3對腫瘤細胞的抑制率，方差分析，24小時組：低劑量組與中劑量組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），低、中劑量組與高劑量組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01）；48小時組，低劑量組與中、高劑量組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01），中劑量組與高劑量組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；72小時組：低劑量組與中、高劑量組相比均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01），中劑量

8、組與高劑量組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。低、中、高劑量組：24小時組與48小時組、72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01、P<0.01），48小時組與72小時組相比，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。說明人參皂苷Rg3對HT-29細胞生長的抑制作用與藥物濃度及作用時間呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.抑制MMP-9的表達，促進TIMP-1的表達，是人參皂苷Rg3抗腫瘤的機制之一。在一定的藥物濃度和作用