Nrf2在香煙煙霧提取物刺激人肺動脈內皮細胞中的表達變化及與衰老的關系.pdf

1、背景：
　　慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是世界上最常見的慢性疾病之一，吸煙是其最常見也是最危險的因素。COPD的一個重要合并癥是肺血管重塑所致的持續(xù)性肺動脈高壓。氧化應激與COPD的發(fā)展及加重密切相關。大量研究證明，Nrf2在吸煙誘導的抗氧化損傷反應中起關鍵作用，同時氧化應激與細胞的衰老密切相關,近來研究表明，肺血管重塑與衰老有關。目前關于Nrf2在香煙煙霧提取物（CSE）誘導細胞衰老中的作用的研究報道還很少。
　　目的:<

2、br>　　觀察CSE誘導的人肺動脈內皮細胞中Nrf2蛋白及衰老相關蛋白的表達情況，為深入探討Nrf2在吸煙相關肺動脈高壓和肺血管重塑中的作用提供新思路與實驗依據。
　　方法:
　　采用香煙煙霧提取物（CSE）刺激人肺動脈內皮細胞（HPAEC），用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)；CCK-8檢測細胞活性；Western blot檢測Nrf2及其穩(wěn)定蛋白DJ-1、下游抗氧化蛋白血紅素氧合酶1（HO-1）和醌氧化還原酶（NQO1）、衰老

3、相關蛋白的表達變化；細胞免疫熒光檢測Nrf2、P53、P16蛋白表達變化；采用衰老相關β-半乳糖苷酶試劑盒檢測細胞β-半乳糖苷酶的表達變化；應用ELISA實驗檢測細胞因子TNFα、MCP-1、TGF-β1、bFGF、IL-6表達水平的變化。
　　結果:
　　1、CSE刺激誘導人肺動脈內皮細胞形態(tài)學改變
　　隨著CSE濃度升高和刺激時間延長,HPAEC逐漸伸展扁平、細胞間隙增寬、立體感減弱，細胞質內出現大量顆粒和空泡。<

4、br>　　2、CSE刺激誘導人肺動脈內皮細胞的細胞活性變化
　　隨著CSE濃度升高，培養(yǎng)的人肺動脈內皮細胞增殖活性逐漸降低，尤其從1.5％CSE開始明顯降低。
　　3、CSE刺激誘導人肺動脈內皮細胞內多種蛋白質的表達變化
　?。?）隨CSE濃度升高和刺激時間延長，細胞內Nrf2蛋白及其穩(wěn)定蛋白DJ-1表達先增高后降低。
　?。?）隨CSE濃度升高和刺激時間延長，細胞內Nrf2調控的抗氧化蛋白HO-1、NQO1表達

5、先增高后降低。
　?。?）隨CSE濃度升高和刺激時間延長，衰老相關蛋白P53、P21、P16表達逐漸增高。
　　4、CSE刺激誘導人肺動脈內皮細胞內β-半乳糖苷酶表達變化
　　隨CSE濃度升高和刺激時間延長，細胞內衰老相關β-半乳糖苷酶表達逐漸增高。
　　5、CSE刺激誘導人肺動脈內皮細胞細胞因子表達變化
　　隨CSE刺激時間延長，細胞培養(yǎng)基上清內細胞因子TNFα、MCP-1、TGF-β1、bFGF、IL-