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文檔簡介
1、目的:間充質(zhì)干細胞(MSCs)已經(jīng)被認為是一種非常有潛力的干細胞移植治療急性腎損傷(AKI)。然而這種治療的療效受限于移植的MSCs在靶向區(qū)域的低滯留率和低存活率。溫敏性氯化殼聚糖(CSCI)水凝膠作為一種可注射性支架材料,具有良好的生物相容性和可降解性,已經(jīng)被廣泛的用于各種組織工程中。在本項研究中,CSCI水凝膠作為可注射性支架傳遞脂肪間充質(zhì)干細胞(ADMSCs)移植治療缺血再灌注(I/R)引起的急性腎損傷(AKI)。
材料
2、和方法體外:分離和培養(yǎng)大鼠ADMSCs并鑒定其表型,攜帶有熒光素酶-紅色熒光蛋白(fluc-mrfp)報告基因的慢病毒轉(zhuǎn)染ADMSCs,并鑒定fluc-mrfp兩種報告基因的表達以及轉(zhuǎn)染后ADMSCs的成脂、成骨分化能力;制備溫敏性CSCI水凝膠,Live/Dead染色檢測CSCI水凝膠與ADMSCs的細胞相容性。體內(nèi):構建成年SD大鼠(150-200g)的缺血再灌注損傷的AKI模型,溫敏性CSCI水凝膠攜帶或不攜帶ADMSCs注射到大
3、鼠AKI模型中。DHE染色用來檢測體內(nèi)活性氧(ROS)的水平。為了示蹤移植體內(nèi)的ADMSCs,使用活體生物發(fā)光成像儀(BLI)檢測(fluc-mrfp)標記的ADMSCs在大鼠腎臟內(nèi)的滯留和存活情況。HE染色及血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平用來檢測腎臟的損傷和腎功能恢復情況。免疫熒光染色用來研究ADMSCs在體內(nèi)的分化情況。宿主腎臟細胞的增殖和凋亡使用PCNA染色和TUNEL染色法。
結果:體外:ADMSCs呈長梭形
4、,流式細胞儀示:CD29,CD90表達陽性,CD34,CD45,CD31表達陰性。慢病毒轉(zhuǎn)染后的ADMSCs表達fluc-mrfp報告基因,并且仍具有成脂、成骨分化的能力。Live/Dead染色證實CSCI水凝膠和ADMSCs復合后具有良好的細胞相容性。體內(nèi):CSCI水凝膠可以明顯改善AKI的微環(huán)境通過降低ROS水平。同時CSCI水凝膠可以改善移植的ADMSCs在腎臟內(nèi)的滯留和存活,而且CSCI水凝膠可以增強宿主腎臟細胞的增殖活力并減少
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