慢病毒載體介導(dǎo)的ANNEXIN A10瘤內(nèi)注射對(duì)HepG2細(xì)胞皮下移植瘤抑制作用的研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名( 手寫(xiě)) ：枷撕 簽字日期：。2 口似年6 月7 日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)

2、位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊( 光盤(pán)版) 電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾

3、提供信息服務(wù)。( 保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名( 手寫(xiě)) ： 導(dǎo)師簽名( 手寫(xiě))例橢簽字日期：p 護(hù)他年6 月7 日：峨簽字日期：滬c 筍勺6 月◇了日摘要目的：摘要1 、構(gòu)建人肝癌細(xì)胞株H e p G 2 裸鼠皮下移植瘤模型；2 、觀察重組A N X A l 0 過(guò)表達(dá)慢病毒對(duì)H e p G 2 裸鼠皮下移植瘤體生長(zhǎng)情況的影響及其對(duì)移植瘤細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶．9 ( m a t r i x m e t a l

4、l o p r o t e i n a s e 一9 ，M M P ．9 ) 、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子( v a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ，V E G F ) 表達(dá)的影響。初步闡明A N X A l 0 基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞株H e p G 2 裸鼠皮下移植瘤瘤體增殖、凋亡的影響及肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞因子M M P ．9 、V E G F 的影響。方法：1

5、 、制備濃度為1 ×1 0 7 個(gè)／m l 的H e p G 2 細(xì)胞懸液，取O ．2 m l 細(xì)胞懸液注入裸鼠右側(cè)腋下。2 4 天后，瘤體最大直徑長(zhǎng)至1 ．7 —2 ．0 c m 時(shí)，取出瘤體，剪成l m m x l m m x l m m 大小組織塊，分別接種至2 4 只雌性裸鼠右側(cè)腋窩皮下，每3天測(cè)量瘤體大小，計(jì)算瘤體體積。2 、組織塊移植后7 天，瘤體直徑長(zhǎng)至O ．3 ．0 ．5 c m 時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為3 組，分別

6、命名為實(shí)驗(yàn)組( L v ．A N X A l 0 組) 、陰性對(duì)照組( 空載慢病毒組) 、空白對(duì)照組。每只動(dòng)物給予慢病毒量為2 x 1 0 7 T U ( 1 0 0 u 1 ) ，空白對(duì)照組給予等量的P B S ；3 h 后重復(fù)注射一次。4 周后處死2 4 只裸鼠，并取出裸鼠皮下瘤體。采用R T —P C R在分子水平檢測(cè)A N X A l 0 基因m R N A 的變化，采用免疫組化在組織層面檢測(cè)A N X A l 0 蛋白的表達(dá)，

7、并運(yùn)用同樣的方法分別從基因和／或組織水平檢測(cè)M M P 9 、V E G F 表達(dá)的變化。t u n e l 法檢測(cè)各組瘤體細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：1 、成功構(gòu)建人肝癌細(xì)胞株H e p G 2 裸鼠皮下移植瘤模型2 、實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)明顯受抑制，體積和重量均明顯小于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組( 體積：F = 1 9 ．1 3 ，P < O ．0 1 ；重量：F = 4 6 ．9 1 ，P < O ．0 1 )3 、半定量P