PI3K-自噬途徑介導apelin-13促H9c2心肌細胞IL-8分泌.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究apelin/APJ系統(tǒng)對大鼠H9c2心肌細胞中白細胞介素8分泌的影響，并進一步探索PI3K-自噬途徑參與H9c2大鼠心肌細胞白細胞介素8分泌的調控機制。
　　方法:
　　1.序列比對法：預測apelin的受體APJ與白細胞介素8受體CXCR的同源性；
　　2. ELISA法：檢測培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞分泌的白細胞介素8（IL-8）含量；
　　3.WesternBlot：檢測培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞A

2、PJ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表達；檢測PI3K、Akt、ERK1/2磷酸化水平；
　　4.生化檢測：檢測培養(yǎng)大鼠 H9c2心肌細胞分泌的乳酸脫氫酶（LDH）和天冬氨酸轉移酶（AST）水平。
　　結果：
　　1.Apelin的受體APJ與白細胞介素8受體CXCR同源性為47％；
　　2.培養(yǎng)大鼠 H9c2心肌細胞在基礎情況下能分泌 IL-8；apelin-13（0-1μM）孵育大鼠H9c2心肌細胞（0-2

3、4h）促進IL-8分泌，濃度為0.01μM、時間為6小時時促分泌作用達峰值；與陰性對照組比較，shRNA干擾沉默 APJ表達后能抑制apelin-13誘導的培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞IL-8分泌；
　　3.孵育apelin-13（2μM）處理培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞4小時可以上調培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞PI3K、Akt和ERK1/2磷酸化水平；
　　4. PI3K特異性抑制劑 LY294002（25μM）、 Akt特異性抑制劑

4、1701-1（10μM）和 ERK1/2特異性抑制劑 PD98059（10μM）均可以抑制培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞中apelin-13誘導的IL-8的分泌；
　　5.Apelin-13濃度依賴性（0-1μM）和時間依賴性（0-24h）促進培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞中自噬標志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表達；
　　6.PI3K特異性抑制劑 LY294002（25μM）和 Akt特異性抑制劑1701-1（10μM）可以抑制

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