人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘為主要病理特征的自身免疫性疾病，迄今尚無確定有效的治愈方法。近年來干細(xì)胞移植在MS治療方面展示出廣闊前景，其中間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有多分化潛能、低免疫原性及高度增殖能力，可通過神經(jīng)營養(yǎng)、調(diào)節(jié)免疫等多種作用修復(fù)神經(jīng)損傷。與目前最常應(yīng)用的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，本研究采用的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Huma

2、n Umbilical cord mesenchymal stemcells，hUC-MSCs)更具備采集方便等多種優(yōu)點(diǎn)，是目前干細(xì)胞移植治療的理想選擇。然而，迄今應(yīng)用hUC-MSCs治療MS的研究卻鮮有報(bào)道。本研究以實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)為MS動物模型，觀察應(yīng)用hUC-MSCs治療EAE小鼠的療效，并對其作用機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 方

3、法：雌性C57BL/6小鼠經(jīng)髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白(MOG)等免疫誘導(dǎo)EAE模型(免疫之日記為第0天)，于第15天(疾病高峰期)尾靜脈注射0.5ml hUC-MSCs(4×106/ml)或同體積培養(yǎng)基。免疫之日起每日進(jìn)行神經(jīng)功能評分，連續(xù)50天。通過HE、luxol fast blue、銀染及免疫組化等方法觀察腦與脊髓中炎癥反應(yīng)、脫髓鞘病變、軸突損傷及治療后hUC-MSCs是否在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布；通過流式細(xì)胞技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測脾細(xì)胞

4、中Th1/Th2CD4+Th細(xì)胞比例、Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞百分比，以及脾細(xì)胞增殖和炎癥因子(IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ)的水平；通過定量PCR及western blot檢測腦與脊髓中髓鞘再生相關(guān)的Lingo-1 mRNA及Fyn蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1、干細(xì)胞的治療作用：hUC-MSCs治療組行為學(xué)評分比EAE組顯著降低(P<0.05)。組織病理學(xué)顯示，hUC-MSCs可以進(jìn)入EAE小鼠腦與脊髓，治

5、療后脊髓中炎癥反應(yīng)與軸突損傷比EAE組明顯減輕，脫髓鞘病變顯著改善(P<0.05)。2：機(jī)制探討：1)干細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，減輕機(jī)體損傷：hUC-MSCs治療組比EAE組Th1/Th2 CD4+Th細(xì)胞比例下降，Th17細(xì)胞減少，Treg細(xì)胞增多(P<0.05)；MOG與ConA(刀豆素)誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖減少(P<0.05)；脾細(xì)胞上清中IL-4、IL-10、IFN-γ增高，IL-17降低(P<0.05)。2)干細(xì)胞促進(jìn)髓鞘再生：hUC-