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文檔簡介
1、目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘為主要病理特征的自身免疫性疾病,迄今尚無確定有效的治愈方法。近年來干細(xì)胞移植在MS治療方面展示出廣闊前景,其中間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多分化潛能、低免疫原性及高度增殖能力,可通過神經(jīng)營養(yǎng)、調(diào)節(jié)免疫等多種作用修復(fù)神經(jīng)損傷。與目前最常應(yīng)用的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,本研究采用的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Huma
2、n Umbilical cord mesenchymal stemcells,hUC-MSCs)更具備采集方便等多種優(yōu)點,是目前干細(xì)胞移植治療的理想選擇。然而,迄今應(yīng)用hUC-MSCs治療MS的研究卻鮮有報道。本研究以實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)為MS動物模型,觀察應(yīng)用hUC-MSCs治療EAE小鼠的療效,并對其作用機制進行探討。
方
3、法:雌性C57BL/6小鼠經(jīng)髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白(MOG)等免疫誘導(dǎo)EAE模型(免疫之日記為第0天),于第15天(疾病高峰期)尾靜脈注射0.5ml hUC-MSCs(4×106/ml)或同體積培養(yǎng)基。免疫之日起每日進行神經(jīng)功能評分,連續(xù)50天。通過HE、luxol fast blue、銀染及免疫組化等方法觀察腦與脊髓中炎癥反應(yīng)、脫髓鞘病變、軸突損傷及治療后hUC-MSCs是否在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布;通過流式細(xì)胞技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測脾細(xì)胞
4、中Th1/Th2CD4+Th細(xì)胞比例、Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞百分比,以及脾細(xì)胞增殖和炎癥因子(IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ)的水平;通過定量PCR及western blot檢測腦與脊髓中髓鞘再生相關(guān)的Lingo-1 mRNA及Fyn蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:1、干細(xì)胞的治療作用:hUC-MSCs治療組行為學(xué)評分比EAE組顯著降低(P<0.05)。組織病理學(xué)顯示,hUC-MSCs可以進入EAE小鼠腦與脊髓,治
5、療后脊髓中炎癥反應(yīng)與軸突損傷比EAE組明顯減輕,脫髓鞘病變顯著改善(P<0.05)。2:機制探討:1)干細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),減輕機體損傷:hUC-MSCs治療組比EAE組Th1/Th2 CD4+Th細(xì)胞比例下降,Th17細(xì)胞減少,Treg細(xì)胞增多(P<0.05);MOG與ConA(刀豆素)誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖減少(P<0.05);脾細(xì)胞上清中IL-4、IL-10、IFN-γ增高,IL-17降低(P<0.05)。2)干細(xì)胞促進髓鞘再生:hUC-
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