血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響.pdf

1、目的：
　　1.探討血管內(nèi)皮前體細(xì)胞（EPC）對間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）成骨分化的影響以及機(jī)制。
　　2.探討EPC對MSC成軟骨分化的影響。
　　方法：
　　1.利用全骨髓貼壁法從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)分離MSC，流式細(xì)胞術(shù)檢測第三代細(xì)胞表面分子表達(dá)情況；成骨、成軟骨誘導(dǎo)檢測其分化能力。
　　2.利用差速貼壁法分離EPC，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測第三代細(xì)胞表面分子，進(jìn)一步采用體外管腔結(jié)構(gòu)形成實(shí)驗(yàn)對其功能進(jìn)行鑒定

2、。
　　3.茜素紅染色檢測 MSC/EPC共培養(yǎng)、不同濃度的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞條件培養(yǎng)基下（EPC-CM）對MSC成骨分化的影響。
　　4.提取血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的條件培養(yǎng)基并用ELISA檢測VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、bFGF的含量。
　　5.在50％EPC-CM基礎(chǔ)上，分別加入上述6個(gè)細(xì)胞因子的中和抗體，茜素紅染色檢測EPC-CM中參與促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞成骨分化的細(xì)胞因子。
　　6.阿利辛

3、藍(lán)染色檢測MSC/EPC共培養(yǎng)、不同濃度的EPC-CM對MSC成軟骨分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.體外分離培養(yǎng)的MSC表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)記物，幾乎不表達(dá)造血系細(xì)胞的標(biāo)志物，具備成骨、成軟骨分化能力。
　　2.利用差速貼壁法所得的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞同時(shí)表達(dá)造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物，并且能在基質(zhì)膠上形成管腔樣結(jié)構(gòu)。
　　3. MSC/EPC組礦化結(jié)節(jié)形成明顯多于MSC組，鈣鹽半定量檢測示MSC/EPC組OD值大

4、于MSC組OD值，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＜0.001；50%EPC-CM組礦化結(jié)節(jié)形成多于25%EPC-CM組，25%EPC-CM組多于0%EPC-CM組；半定量分析50%EPC-CM組OD值大于25%EPC-CM組OD值（P＜0.01），25%EPC-CM組OD值大于0%EPC-CM組OD值（P＜0.01）。
　　4. EPC分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、bFGF。
　　5.在50%EPC-CM下，加入

5、VEGF、TGFβ1、IGF-1抗體的三組礦化鈣結(jié)節(jié)數(shù)量相對于對照組明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　6. MSC/EPC組的糖胺聚糖沉積量明顯多于MSC組（P＜0.001）；糖胺聚糖沉積量在50%EPC-CM組、25%EPC-CM組、0%EPC-CM組無差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.血管內(nèi)皮前體細(xì)胞或許是通過其分泌的VEGF、TGFβ1、IGF-1促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化。
　　2.在