黃芪甲苷對海人酸腦損傷大鼠海馬細(xì)胞增殖的影響和神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:癲癇是由大腦神經(jīng)元反復(fù)超同步放電致反復(fù)性驚厥發(fā)作為特征的一種神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病。癲癇發(fā)作能造成神經(jīng)元損傷已被廣泛認(rèn)可,而另一方面多種外部因素的改變,比如癲癇、帕金森病等可以影響發(fā)育中的和成年嚙齒類動(dòng)物的神經(jīng)元的產(chǎn)生。近年成年哺乳動(dòng)物海馬神經(jīng)發(fā)生的調(diào)控機(jī)制的研究顯示,局部微環(huán)境控制了神經(jīng)發(fā)生,此認(rèn)識(shí)在理解神經(jīng)干細(xì)胞如何增殖、分化,最終整合到成熟的神經(jīng)環(huán)路中有重要作用。黃芪甲苷是從黃芪中提取的有效單體成分,具有抗氧化、抗應(yīng)激、抗炎、免疫

2、調(diào)節(jié)、健腦益智等多種藥理作用,故此實(shí)驗(yàn)希望進(jìn)一步了解黃芪甲苷對大鼠癲癇模型(海人酸KA模型)是否具有促進(jìn)海馬細(xì)胞增殖作用基礎(chǔ)上,進(jìn)一步明確黃芪甲苷對在體癲癇大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 方法:本研究將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、黃芪甲苷干預(yù)組,應(yīng)用立體定向腦室內(nèi)微量注射的方法建立KA誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型。采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響:尼氏染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元的形態(tài)及數(shù)目改變；BrdU和免疫組織化學(xué)方法

3、來觀察大鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層BrdU陽性細(xì)胞數(shù)目及海馬齒狀回區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目的變化；觀察黃芪甲苷干預(yù)對海馬細(xì)胞增殖的影響及對腦損傷后的保護(hù)作用,為進(jìn)一步研究癲癇有效治療方式提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 結(jié)果:1、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(1)定位航行試驗(yàn):各時(shí)間點(diǎn)第1天,假手術(shù)組與模型組、黃芪甲苷干預(yù)組比較有顯著差異(p<0.01),而模型組與黃芪甲苷干預(yù)組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；第2天,與假手術(shù)組的逃避潛伏期比較,模

4、型組逃避潛伏期明顯延長(p<0.05)；黃芪甲苷干預(yù)組的逃避潛伏期較模型組無差異(P>0.05)。第3-5天,模型組大鼠的逃避潛伏期與假手術(shù)組及黃芪甲苷干預(yù)組比較逃避潛伏期明顯延長(P<0.05)；(2)空間探索試驗(yàn)結(jié)果:模型組大鼠120s內(nèi)穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)明顯低于假手術(shù)組(P<0.01)；黃芪甲苷干預(yù)組大鼠120s內(nèi)穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)與模型組比較增多(P<0.05)；2、致癇后海馬尼氏染色可見模型組CA1區(qū)神經(jīng)元內(nèi)尼氏小體脫失明顯,

5、通過存活細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示各時(shí)間點(diǎn)黃芪甲苷可以減輕上述損傷,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3、神經(jīng)膠質(zhì)纖維蛋白(GFAP)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:各組海馬齒狀回區(qū)及皮層均可見GFAP免疫反應(yīng)陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞,陽性細(xì)胞呈棕褐色,細(xì)胞形態(tài)如蜘蛛,有突起,突起上有分支,對分布較多的DG區(qū)進(jìn)行觀察顯示各時(shí)間點(diǎn)黃芪甲苷藥物干預(yù)組較假手術(shù)組及癲癇模型組GFAP免疫反應(yīng)陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；4、BrdU免疫組織化學(xué)染色研究顯示各時(shí)間點(diǎn)黃

6、芪甲苷藥物干預(yù)組較假手術(shù)組及癲癇模型組海馬齒狀回區(qū)細(xì)胞增殖數(shù)目增加(p<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1.KA導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)典型的癲癇樣行為學(xué)表現(xiàn)和特征性腦電圖改變并造成海馬神經(jīng)元變性、死亡,細(xì)胞結(jié)構(gòu)瓦解等損傷。充分說明大鼠KA快速點(diǎn)燃模型的建立是成功的。對進(jìn)一步研究癲癇的發(fā)病機(jī)制和篩選抗癲癇藥物提供了理想的動(dòng)物模型。2.KA致癇后可造成KA模型大鼠的認(rèn)知與記憶能力有明顯下降。其改變可能與海馬神經(jīng)元變性、死亡,細(xì)胞結(jié)構(gòu)瓦