2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘疾病,其典型的病理特征是炎性細胞浸潤、髓鞘脫失、軸索變性及膠質(zhì)細胞增生等。具有復發(fā)、緩解及致殘率高等特點。由于MS病人的標本不易獲取,限制了對該疾病的研究,因此建立合適的動物模型是研究MS發(fā)病機制、病理變化及治療措施的關鍵。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)被公認為

2、是MS的理想模型。目前國際上認為髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白(myelin oligodendrocyteglycoprotein MOG)多肽片段誘導的EAE模型更能從發(fā)病機制上模擬MS;而且用MOG多肽片段免疫大鼠或小鼠逼真地再現(xiàn)了復發(fā)緩解(RR)型、原發(fā)進展(PP)型、繼發(fā)進展(SP)型、Devic病、Marburg等各種類型MS的臨床病程;其敏感鼠C57BL/6品系純正、遺傳背景知識全面、豐富,遺傳學、免疫學等的研究也較深入,且較PL

3、/J和SJL等其他小鼠價格便宜且國內(nèi)易得。因此用MOG作為免疫原誘導C57BL/6小鼠能更好地為MS/EAE發(fā)病機制的闡明提供研究材料。
   目的:本實驗旨在應用MOG35-55誘導C57BL/6小鼠建立EAE模型,并觀察其病程及不同時期的病理特點,為進一步研究MS的發(fā)病機制、病理特點及治療措施提供一定的實驗基礎。
   方法:1動物分組:將24只8-10周雌性C57BL/6小鼠,體重18.20g,隨機分為EAE組和正

4、常對照組,其中正常對照組9只,EAE組15只。其中各組又分為急性期(EAE小鼠第一次發(fā)病癥狀達峰時)和慢性期(60天)兩個亞組,EAE組急性期亞組為9只,慢性期亞組為6只;正常對照組急性期亞組3只,慢性期亞組6只。2模型制備:將抗原MOG35-55用生理鹽水稀釋成6mg/ml,并按1:1等體積加入完全弗氏佐劑(其中結(jié)核桿菌H37Ra終濃度為4mg/m1)混合,乳化后按每只O.1ml于小鼠脊柱兩側(cè)分四點皮下注射,免疫當天即Oh及第48h腹

5、腔注射0.5ml PTX(1400ng/只)。免疫當天記為0天,免疫在乙醚麻醉及充分固定下進行。空白對照組9只,不作任何處理。3發(fā)病動物的評估:采用雙盲法每日早晚(8:00和16:00)兩次對小鼠進行稱重、評估。Benson評分標準,O分:無任何臨床癥狀;1分:尾部張力消失,可見輕度步態(tài)笨拙;2分:雙后肢無力,被動翻身后可以恢復;3分:雙后肢癱瘓,被動翻身后不能恢復,但給予刺激后可以挪動;4分:雙后肢癱瘓,前肢癱瘓或肌力減弱伴尿便失禁;

6、5分:瀕死狀態(tài)或死亡。癥狀介于兩者標準之間者以土0.5計;“每日積分均值”由當日組內(nèi)所有動物分值總和除以該組動物數(shù)量所得。4組織病理學:在動物麻醉狀態(tài)下,急性期:EAE組取9只小鼠,正常對照組取3只;慢性期:各組各取3只,經(jīng)水合氯醛麻醉后,4%多聚甲醛灌流,取腦和脊髓頸、胸、腰膨大處組織石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,分別作HE染色、Mallory磷鎢酸蘇木素染色和Bielschowsky’s改良銀染,8μm連續(xù)切片做LFB染色,光鏡觀察;另

7、外,慢性期組再各取3只經(jīng)電鏡液灌注取腦和脊髓,4%戊二醛固定,制作超薄切片,電鏡觀察。
   結(jié)果:
   1本實驗終止時,EAE組小鼠總發(fā)病率達100%,平均發(fā)病時間為(14.00±2.45)d,平均癥狀達峰時間為(18.75±4.10)d,最大癥狀評分為(2.42±0.66)分。在整個病程過程中,小鼠癥狀均出現(xiàn)復發(fā)緩解,平均復發(fā)次數(shù)為:(2.50±0.84),隨著病程的進展,66.7%的小鼠臨床評分恢復到O.5-1分

8、;而33.3%的小鼠癥狀不再緩解,出現(xiàn)持續(xù)的神經(jīng)功能障礙;
   2 EAE組和正常對照組小鼠的神經(jīng)功能評分的均數(shù)分別為:1.28±O.70、0.00±0.00,兩組比較EAE組小鼠的神經(jīng)功能評分顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
   3 EAE組和正常對照組小鼠體重的均數(shù)分別為19.27±O.87、20.99±1.55,兩組比較EAE組小鼠體重顯著減輕,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
  

9、4光鏡下可見急性期和慢性期兩個時期均有炎細胞浸潤,急性期及慢性期炎癥細胞浸潤的均數(shù)分別為:17.33±4.63、28.50±8.09,對照組為:5.00±0.00,慢性期炎性細胞浸潤明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
   5 LFB染色觀察急性期及慢性期均有不同程度的髓鞘脫失,急性期及慢性期均數(shù)分別為:31.33±3.31、18.83±5.00,對照組均數(shù)為:5.00±0.00,EAE組兩個亞組和對照組相比,差異均具有

10、統(tǒng)計學意義(P<0.05);EAE組內(nèi)急性期和慢性期相比,急性期脫髓鞘明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   6 Bielschowsky’s改良銀染顯示EAE組急性期和慢性期均有軸索腫脹、變性和軸索卵形體的形成;正常對照組軸索正常;
   7電鏡下可見髓鞘板層結(jié)構(gòu)松散、紊亂,甚至向內(nèi)塌陷;髓鞘與軸索分離;還可以觀察到不同程度的髓鞘再生;同時可見軸索內(nèi)線粒體腫脹、軸索萎縮甚至消失。
   結(jié)論:本實驗應

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