MOG-TrxA誘導(dǎo)C57BL-6（H-2b）小鼠EAE動(dòng)物模型的建立及其中樞神經(jīng)系統(tǒng)AQP-4表達(dá)的研究.pdf

1、目的： (1)探索利用基因工程生產(chǎn)的少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白-硫氧還融合蛋白(MOG-TrxA)免疫C57BL/6(H-2b)小鼠建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)動(dòng)物模型的方法。 (2)檢測(cè)EAE動(dòng)物模型中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)病灶周圍AQP-4的免疫反應(yīng)模式和表達(dá)量，進(jìn)一步探討AQP-4表達(dá)量與炎癥浸潤(rùn)的和脫髓鞘的關(guān)系。以此初步了解EAE動(dòng)物模型病灶周圍AQP-4的表達(dá)模式是與多發(fā)性硬化(MS)還是與視神經(jīng)脊髓炎(NMO

2、)相似。 方法： (1)利用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)重組成功的攜帶pET32(a)-MOG-TrxA質(zhì)粒的大腸桿菌BL21-TrxA-和攜帶pET32(a)-TrxA質(zhì)粒的空載大腸桿菌BL21-TrxA-分別誘導(dǎo)大量表達(dá)MOG-TrxA和TrxA，并利用蛋白質(zhì)金屬螯和親和層析的方法純化，超濾法濃縮除鹽，Bradford法蛋白定量，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定所制備的蛋白。 (2)利用制備的MOG-TrxA抗原免疫C57BL/

3、6(H-2b)小鼠誘導(dǎo)EAE動(dòng)物模型，以TrxA免疫動(dòng)物作為對(duì)照組，同時(shí)以NS免疫動(dòng)物作為陰性對(duì)照，以SCH免疫動(dòng)物作為陽性對(duì)照，通過觀察動(dòng)物的臨床評(píng)分曲線，體重變化曲線和組織病理(HE染色和Klüver-Barrera髓鞘染色)情況，評(píng)價(jià)模型的質(zhì)量。 (3)應(yīng)用免疫組化定性和半定量分析EAE動(dòng)物模型中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNs)病灶周圍水通透蛋白-4(AQP-4)的免疫反應(yīng)模式和表達(dá)量，并進(jìn)一步應(yīng)用熒光定量的方法精確定量CNSAQP-

4、4mRNA的水平，與對(duì)照組進(jìn)行比較分析。 (4)利用相關(guān)分析的方法探討EAE動(dòng)物模型CNSAQP-4表達(dá)量與炎癥浸潤(rùn)和脫髓鞘的相關(guān)性。 結(jié)果： (1)MOG-TrxA組動(dòng)物臨床評(píng)分，HE染色病理評(píng)分和Klüver-Barrera髓鞘染色病理評(píng)分與rxA組相比明顯增高，體重明顯下降，數(shù)據(jù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與SCH組相比差異統(tǒng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 (2)免疫組化定性和半定量分析顯示

5、MOG-TrxA組和SCH組EAE動(dòng)物病灶周圍炎癥浸潤(rùn)處AQP-4表達(dá)與TrxA組相比明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。MOG-TrxA組與SCH組相比AQP-4表達(dá)量無差異(P＞0.05)。熒光定量顯示MOG-TrxA組和SCH組EAE動(dòng)物CNSAQP-4mRNA表達(dá)量與TrxA組相比明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。MOG-TrxA組與SCH組AQP-4mRNA表達(dá)量無差異(P＞0.05)。相關(guān)分析顯示MOG-T

6、rxA組和SCH組AQP-4表達(dá)量與HE病理評(píng)分相關(guān)(MOG-TrxA組r=0.62，P=0.002；SCH組r=0.44，P=0.019)，與Klüver-Barrera脫髓鞘評(píng)分不相關(guān)(MOG-TrxA組r=0.31，P=-0.059；SCH組r=0.30，P=0.054)。 結(jié)論： (1)利用基因工程制備的MOG-TrxA免疫C57BL/6(H-2b)小鼠能成功建立慢性非緩解型EAE動(dòng)物模型。 (2)EAE