組織擴(kuò)張對(duì)人皮膚基因表達(dá)譜影響的初步研究.pdf

1、組織擴(kuò)張可以促進(jìn)皮膚的生物性生長(zhǎng)，從而提供多余的皮膚來修復(fù)缺損。其潛在的分子生物學(xué)機(jī)制已通過體外以細(xì)胞為模型的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了廣泛研究。表明機(jī)械擴(kuò)張可以引起一系列復(fù)雜的、多級(jí)聯(lián)參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，最終促使細(xì)胞增殖。但對(duì)于組織擴(kuò)張?jiān)隗w內(nèi)引起成體皮膚組織再生的機(jī)制目前尚無相關(guān)的研究。本課題利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)皮膚擴(kuò)張前后發(fā)生差異表達(dá)的基因，對(duì)組織擴(kuò)張引起的基因表達(dá)譜變化有一整體認(rèn)識(shí)，并從基因水平對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討，以探測(cè)與皮膚再生的調(diào)控密切相關(guān)的基

2、因，從而進(jìn)一步了解組織擴(kuò)張引起皮膚再生的機(jī)制。
　　 本課題選取3對(duì)皮膚組織樣本，分別來自3位常規(guī)組織擴(kuò)張術(shù)患者的擴(kuò)張前后皮膚。對(duì)樣本進(jìn)行Ki-67免疫組化染色等組織學(xué)分析。并通過基因芯片技術(shù)，在全人類基因組25,000個(gè)轉(zhuǎn)錄本水平上篩選擴(kuò)張前后發(fā)生差異表達(dá)的基因，對(duì)差異基因進(jìn)行分析，并通過RT-PCR在mRNA水平上進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)從基因水平探討其機(jī)制。
　　 通過研究，本課題得出以下結(jié)果：
　　 （1）組織學(xué)檢

3、測(cè)顯示，擴(kuò)張皮膚與正常皮膚相比，細(xì)胞增殖明顯增強(qiáng)，且擴(kuò)張皮膚維持了正常的皮膚結(jié)構(gòu)。
　　 （2）根據(jù)DiffScore≥20或者≤-20的篩選標(biāo)準(zhǔn)，基因芯片的檢測(cè)結(jié)果顯示共有77個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因57個(gè)，下調(diào)基因20個(gè)，本研究選取其中上調(diào)表達(dá)倍數(shù)≥2倍的基因進(jìn)行分析，共48個(gè)差異基因。其生物學(xué)功能涉及細(xì)胞因子、細(xì)胞骨架、信號(hào)通路、轉(zhuǎn)錄因子等多個(gè)類別，其中轉(zhuǎn)錄因子HOXA5基因呈現(xiàn)了最為顯著的上調(diào)表達(dá)，并且與其同屬一個(gè)家

4、族的HOXB2基因也顯示了增高表達(dá)。RT-PCR的驗(yàn)證結(jié)果與芯片一致。
　　 通過研究，本課題得出以下結(jié)論：
　　 （1）組織學(xué)檢測(cè)證實(shí)組織擴(kuò)張術(shù)可以促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖，并且在擴(kuò)張終止后一段時(shí)間仍能維持其活躍的增殖活性。
　　 （2）基因芯片的研究證實(shí)機(jī)械擴(kuò)張促發(fā)的皮膚再生過程涉及多個(gè)生物學(xué)級(jí)聯(lián)的改變，是由多基因參與的復(fù)雜過程。其中上調(diào)最為顯著的HOXA5基因，在以往關(guān)于機(jī)械擴(kuò)張引起細(xì)胞增殖和組織再生的研究中都未曾