急性髓系白血病和骨髓增生異常綜合征FANCF-FANCD2表達(dá)的研究.pdf

1、范可尼貧血(Fanconianemia，F(xiàn)A)是一種常染色體隱性遺傳性疾病，以染色體不穩(wěn)定，細(xì)胞對(duì)DNA交聯(lián)劑如絲裂霉素C、順鉑高度敏感為特征，并且高度易患癌癥，主要包括急性髓系白血病(AML)，頭頸部鱗狀細(xì)胞癌，婦科癌癥等。目前已將FA基因分為13種FA互補(bǔ)群(A，B，C，D1，D2，E，F(xiàn)，G，I，J，L，M和N)，其中12種FA基因已被克隆出來，它們通過共同途徑組成一個(gè)多蛋白核心復(fù)合物，在FA通路中發(fā)揮重要作用，這也是FANCD2

2、蛋白單泛素化所必須的。FANCF蛋白是范可尼貧血蛋白互補(bǔ)基團(tuán)的重要成員之一，F(xiàn)ANCF作為一種重要的銜接蛋白，參與FA復(fù)合體的穩(wěn)定及FANCD2泛素化激活過程，因此是維持FA通路功能所必需的重要蛋白。FANCF通過FA通路，參與細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡、DNA的修復(fù)、基因轉(zhuǎn)錄與基因穩(wěn)定性等多種生命信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控。FANCF蛋白低表達(dá)及功能缺失與FANCF基因啟動(dòng)子超甲基化相關(guān)。目前，已在多種腫瘤(卵巢癌，口腔癌，肺癌和宮頸癌)中證實(shí)F

3、ANCF蛋白低表達(dá)或功能缺失與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。關(guān)于FANCF、FANCD2在AML和骨髓增生異常綜合征(MDS)中的研究國(guó)內(nèi)尚未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測(cè)FANCF基因的甲基化狀態(tài)和FANCF、FANCD2蛋白的表達(dá)，探討AML、MDS的發(fā)病機(jī)制及與預(yù)后的關(guān)系，為治療提供新的策略。 材料和方法 一、研究對(duì)象 2007年9月份至2008年7月份中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液科就診的AML患者111例，其中男62例

4、，女49例，男女比例1.2:1，中位年齡56歲。初診64例，完全緩解(CR)27例，復(fù)發(fā)20例。MDS患者46例，其中低危組(RA8例、RAS10例)18例，高危組(RAEB13例，RAEB-T15例)28例，中位年齡67歲，男女比例1:1。對(duì)照組42例，為巨幼細(xì)胞貧血、缺鐵性貧血或血小板減少性紫癜患者。診斷符合FAB診斷標(biāo)準(zhǔn)。 二、方法 (1)密度梯度法提取骨髓單個(gè)核細(xì)胞。 (2)酚-氯仿-酚反復(fù)離心法抽提DN

5、A。 (3)MS-PCR檢測(cè)FANCF基因的甲基化狀態(tài)。 (4)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)FANCF、FANCD2蛋白。 (5)Western印跡法檢測(cè)FANCF、FANCD2蛋白。 (6)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理分析，計(jì)量資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用X2檢驗(yàn)，描述性分析采用中位數(shù)(M)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、AMLFANCF基因甲基化狀態(tài)

6、 初診的AML患者甲基化程度高于對(duì)照組和CR組AML患者，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)發(fā)組與初診組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與CR組和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CR組AML患者與對(duì)照組比較，甲基化狀態(tài)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 二、AMLFANCF、FANCD2蛋白的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)顯示FANCF蛋白在AML初診組表達(dá)率9.3％，CR組表達(dá)率74.1％，復(fù)發(fā)

7、組表達(dá)率10.0％，對(duì)照組表達(dá)率80.9％；Western印跡法檢測(cè)顯示初診組表達(dá)率31.2％，CR組表達(dá)率77.8％，復(fù)發(fā)組表達(dá)率30.0％，對(duì)照組表達(dá)率95.2％。初診組與對(duì)照組、CR組表達(dá)率比較，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；復(fù)發(fā)組與初診組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與CR組和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CR組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)顯示FANCD2蛋白在AML初診組

8、表達(dá)率6.3％，CR組表達(dá)率63.0％，復(fù)發(fā)組表達(dá)率5.0％，對(duì)照組表達(dá)率71.4％；Western印跡法檢測(cè)顯示初診組表達(dá)率34.3％，CR組表達(dá)74.1％，復(fù)發(fā)組表達(dá)率35.0％，對(duì)照組表達(dá)率88.1％。初診組與對(duì)照組、CR組表達(dá)率比較，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；復(fù)發(fā)組與初診組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與CR組和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CR組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 三、

9、MDSFANCF基因甲基化狀態(tài) MDS患者高危組和低危組均表現(xiàn)出高甲基化狀態(tài)，與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；MDS患者高危組甲基化程度高于低危組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 四、MDSFANCF、FANCD2蛋白的表達(dá) 免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示FANCF蛋白在MDS低危組表達(dá)率5.6％、高危組表達(dá)率3.6％，對(duì)照組表達(dá)率80.9％；Western印跡法檢測(cè)顯示低危組表達(dá)率11.1％，高危組表

10、達(dá)率7.1％，對(duì)照組表達(dá)率95.2％，MDS病例組與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示FANCD2在MDS低危組表達(dá)率16.7％、高危組表達(dá)率7.1％，對(duì)照組表達(dá)率71.4％；Western印跡法檢測(cè)顯示低危組表達(dá)率22.2％，高危組表達(dá)率10.7％，對(duì)照組表達(dá)率88.1％，MDS病例組與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 本研究顯示AML患者組FANCF基因甲基化狀態(tài)顯著高于

11、對(duì)照組，且初治AML甲基化狀態(tài)高于CR組，提示FANCF基因高甲基化可能在AML的發(fā)病過程中起到一定的作用。FANCF蛋白在對(duì)照組中高表達(dá)，初診和復(fù)發(fā)AML組中FANCF蛋白表達(dá)明顯減低或缺失，提示FANCF蛋白與AML的發(fā)病和預(yù)后具有一定相關(guān)性。MDS患者組FANCF基因甲基化狀態(tài)顯著高于對(duì)照組，且高危MDS組FANCF甲基化狀態(tài)高于低危組，提示FANCF基因的高甲基化可能在MDS的病情發(fā)展過程中起到一定作用。FANCF蛋白在低危、高