Cajal間質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)突觸素在先天性膽總管囊腫的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)比分析先天性膽總管囊腫（Congenital choledochal cyst，CCC）不同部位膽道組織與中晚期終止妊娠胎兒膽道組織中Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of Caial，ICC），的分布和突觸素（synaptophysin，SY）的表達(dá)，從膽道動(dòng)力和神經(jīng)傳導(dǎo)角度分析膽道腸神經(jīng)發(fā)育在先天性膽總管囊腫發(fā)病機(jī)制中的作用，豐富和完善CCC的發(fā)病機(jī)理。
　　 方法：隨機(jī)選取2007年1月

2、～2009年1月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院小兒外科收治的先天性膽總管囊腫患兒22例作為實(shí)驗(yàn)組。男4例，女18例，平均年齡4.44±3.90歲（1月～18歲）。其中以腹痛就診者14例，以黃染白便就診者6例，以發(fā)熱嘔吐就診者1例，B超常規(guī)查體時(shí)發(fā)現(xiàn)1例。所有患兒均于術(shù)前經(jīng)B超或CT明確診斷后手術(shù)切除膽總管囊腫和膽囊，行膽腸吻合術(shù)，分別切取膽總管囊腫近端、遠(yuǎn)端的囊壁和膽囊壁做為實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本。另選取計(jì)劃外懷孕中晚期終止妊娠的胎兒11例做為對(duì)照組，男5例

3、，女6例，月齡7.36±0.81月（6～8個(gè)月）。切取胎兒的膽囊和膽總管做為對(duì)照組標(biāo)本。將兩組所得標(biāo)本分別以10％中性甲醛固定、石蠟包埋制成蠟塊，石蠟切片采用S-P法免疫組化染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。采用中高倍光學(xué)顯微鏡觀察石蠟切片，了解CCC患兒膽道組織ICC發(fā)育、分布及SY表達(dá)情況：分別在CCC患兒膽囊、膽總管囊腫壁遠(yuǎn)端和近端、胎兒膽囊以及膽總管免疫組化染色切片中采用多功能真彩色細(xì)胞圖像分析管理系統(tǒng)每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算

4、各部位陽(yáng)性ICC細(xì)胞數(shù)和測(cè)量突觸素陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的面積，每次計(jì)算5個(gè)視野陽(yáng)性總數(shù)。將兩者所得數(shù)據(jù)均分別以x士s表示。分別對(duì)CCC患兒膽道各部位之間、CCC患兒和胎兒膽道各部位之間：ICC和SY的表達(dá)進(jìn)行對(duì)比分析，所得數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0軟件，采用Independent-Sample t test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果：光鏡下在胎兒膽總管免疫組化染色切片觀察，可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)ICC呈紡錘狀或梭形，細(xì)胞核大，呈梭形或卵圓形，核周

5、胞漿少，常有2個(gè)或2個(gè)以上的細(xì)長(zhǎng)突起，依靠突起細(xì)胞間彼此相互連接形成網(wǎng)絡(luò)狀分布，而在CCC囊壁則分布稀疏，遠(yuǎn)端明顯減少甚至缺失。同樣在胎兒膽總管可見(jiàn)SY在神經(jīng)叢與平滑肌接頭處呈棕黃色的陽(yáng)性表達(dá)，而在CCC囊壁近端表達(dá)相對(duì)較弱、遠(yuǎn)端狹窄段不明顯。膽總管囊腫遠(yuǎn)端囊壁ICC計(jì)數(shù)6.55±1.85個(gè)，囊壁近端8.59±3.05個(gè)，膽囊9.59±3.40個(gè)；胎兒膽總管ICC記數(shù)11.82±2.64個(gè)，膽囊9.91±5.68個(gè)。膽總管囊腫遠(yuǎn)端囊壁S

6、Y著色面積為97.37±29.72μ㎡，近端囊壁123.73±51.32μ㎡，膽囊217.16±56.37μ㎡；而胎兒膽總管SY陽(yáng)性表達(dá)面積為229.66±69.35μ㎡，膽囊178.36±39.12μ㎡。CCC囊壁各部位之間、以及與胎兒膽道各部位之間ICC和SY的表達(dá)對(duì)比結(jié)果為：①I(mǎi)CC在CCC遠(yuǎn)、近端囊壁分布比較有明顯差異（t=2.69，P=0.010）；②ICC在CCC囊壁遠(yuǎn)端分布明顯少于胎兒膽總管的分布（t=6.69，P=0.0

7、01）；③ICC在CCC囊壁近端分布亦弱于胎兒膽總管的分布（t=2.99，P=0.005）；④ICC在CCC和胎兒兩組膽囊標(biāo)本中表達(dá)無(wú)明顯差異（t=1.19，P=0.243）⑤SY在CCC囊壁遠(yuǎn)端的表達(dá)明顯弱于近端的表達(dá)（t=2.78，P=0.012）；⑥SY在CCC遠(yuǎn)端囊壁的表達(dá)與胎兒膽總管的表達(dá)相比有更顯著性差異（t=3.65，P=0.004）；⑦SY在CCC近端囊壁的表達(dá)亦弱于在胎兒膽總管的表達(dá)（t=2.99，P=0.048）；⑧

8、SY在CCC和胎兒兩組膽囊標(biāo)本中表達(dá)無(wú)明顯差異（t=2.49，P=0.078）。
　　 結(jié)論：
　　 1.正常胎兒晚期膽總管和膽囊的ICC分布和SY表達(dá)已發(fā)育完善。
　　 2.ICC和SY在膽總管囊腫的分布和表達(dá)均弱于正常胎兒，特別是在CCC囊壁的遠(yuǎn)端出現(xiàn)ICC明顯減少或缺失以及SY的表達(dá)顯著減低，說(shuō)明CCC在胚胎期已因各種原因?qū)е铝四懙繧CC和SY的發(fā)育不良，尤其在膽總管遠(yuǎn)端的發(fā)育缺陷影響了膽總管遠(yuǎn)端神經(jīng)一肌肉