DNA聚合酶X家族新成員—DNA聚合酶λ2功能的初步研究.pdf

1、本研究發(fā)現(xiàn)并克隆了一個(gè)肝臟特異的人類DNA聚合酶基因，是POLλ的一個(gè)剪接體，命名為POLλ2。該基因的eDNA長2206bp，包含一個(gè)1452bp的開放閱讀框，編碼482個(gè)氨基酸，位于人10號(hào)染色體長臂24區(qū)，長約7．9kb，包含8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。生物信息學(xué)分析表明，POL入2蛋白和DNA聚合酶X家族成員高度同源，并含有這個(gè)家族特有結(jié)構(gòu)域POLx，因此是一個(gè)DNA聚合酶X家族的新成員。該基因核苷酸序列和相應(yīng)蛋白氨基酸序列已提交至

2、GenBank，登錄號(hào)為AY302442。 亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)證實(shí)，POL入2蛋白定位于細(xì)胞核；在人16種組織中表達(dá)譜實(shí)驗(yàn)表明，該基因在肝組織中特異性高表達(dá)，在其他組織中不表達(dá)或低表達(dá)；癌和癌旁表達(dá)差異實(shí)驗(yàn)表明；和正常肝組織和癌旁組織相比，在十六個(gè)癌組織的樣本中有80％樣本的POLλ的表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致POLλ2和POLλ的mRNA分子的比例異常，可能和肝癌的病理過程有關(guān)。 大腸桿菌重組表達(dá)融合蛋白POL入2時(shí)，通過菌株篩選，獲

3、得能高表達(dá)POL入2的宿主菌；通過優(yōu)化條件，找到一種可以高效地使POL入2包涵體變?yōu)榭扇艿鞍椎姆椒?，?duì)于其他蛋白表達(dá)時(shí)，減少包涵體蛋白的產(chǎn)生，增加可溶性，具有參考作用。 純化了POL入2蛋白，經(jīng)過同位素Q．p32．dCTP摻入實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了POLλ2具有DNA聚合酶活性；在探索純化原核表達(dá)的融合蛋白POL入2時(shí)，建立了一種新的高效純化方法一脫氧核糖核酸酶純化法，為研究DNA結(jié)合蛋白的純化提供了新思路。 以POLλ2為誘餌蛋