富含血小板血漿在骨組織工程中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的： 1.傳統(tǒng)的細(xì)胞支架復(fù)合方法是直接將細(xì)胞懸液滴加于支架上的靜置接種法。但此方法接種效率低，不僅細(xì)胞流失量大而且不能均勻地分布在三維支架的內(nèi)部。所以有學(xué)者用纖維蛋白原和膠原等水凝膠物質(zhì)的雙相性，將細(xì)胞輸送并包埋于支架內(nèi)，提高了細(xì)胞接種效率。本研究試將富含血小板血漿(platelet—rich plasma PRP)替代水凝膠類(lèi)物質(zhì)作為雙相接種媒介構(gòu)建組織工程骨，以探索更好的細(xì)胞支架復(fù)合方法。因?yàn)镻RP不僅具有類(lèi)似水凝膠的雙相

2、性，重要的是其中的血小板可釋放大量生長(zhǎng)因子。 2.目前在PRP制備中，抗凝劑的使用多樣化，沒(méi)有研究關(guān)注抗凝劑對(duì)PRP活性的影響，本研究欲明確抗凝劑在PRP制備和應(yīng)用中的重要性，及用于PRP制備的最佳抗凝劑，從而為PRP的實(shí)際應(yīng)用提供參考。 方法： 1.分別用自體PRP、自體纖維蛋白原、細(xì)胞培養(yǎng)基為媒介構(gòu)建細(xì)胞/支架復(fù)合物，通過(guò)顯微鏡和電鏡觀察、復(fù)合物中細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)、復(fù)合物堿性磷酸酶活性測(cè)定及成骨基因表達(dá)分析，比較

3、三種接種方法的細(xì)胞接種效率及細(xì)胞在支架內(nèi)的增殖、分化狀態(tài)。將三種接種方法構(gòu)建的細(xì)胞/支架復(fù)合物用于修復(fù)山羊顱骨缺損，通過(guò)影像學(xué)、組織學(xué)檢查比較三種細(xì)胞/支架復(fù)合物體內(nèi)成骨能力。 2.用肝素鈉、枸櫞酸鈉、抗凝枸櫞酸葡萄糖、枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁四種抗凝劑制備PRP，通過(guò)電鏡觀察血小板的微觀結(jié)構(gòu)，檢測(cè)血漿中可溶性P—選擇素濃度，測(cè)定PRP轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子釋放量，觀察PRP對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果： 1.與傳統(tǒng)靜置接種

4、法比較，PRP和自體纖維蛋白原雙相接種法明顯提高細(xì)胞接種效率。PRP較自體纖維蛋白原、細(xì)胞培養(yǎng)基顯著促進(jìn)細(xì)胞在支架中的增殖，同時(shí)不抑制細(xì)胞的分化。以PRP為媒介構(gòu)建的細(xì)胞/支架復(fù)合物較其它兩種復(fù)合物明顯促進(jìn)體內(nèi)新骨形成。 2.枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁抗凝劑與其它抗凝劑相比，能長(zhǎng)時(shí)間保持血小板結(jié)構(gòu)完整，減少血小板在PRP制備過(guò)程中的激活?？鼓蹤此崞咸烟菍?duì)血小板的保護(hù)作用較枸櫞酸—茶堿—腺苷—潘生丁弱，但二者與肝素鈉和枸櫞酸鈉相