京尼平苷對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)提取大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng),應(yīng)用硝普鈉(SNP)誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡,觀察不同濃度京尼平苷干預(yù)后對(duì)軟骨細(xì)胞增殖、凋亡、Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)等的影響,探討京尼平苷治療骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)的可能機(jī)制。
　　方法:(1)提取大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),應(yīng)用HE染色及Ⅱ型膠原細(xì)胞免疫化學(xué)染色法鑒定。(2)選用Ⅱ代軟骨細(xì)胞,同步化培養(yǎng)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組及不同濃度京尼平苷干預(yù)組。(3)噻唑藍(lán)染色(

2、MTT)法檢測(cè)軟骨細(xì)胞增殖。(4)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡;NO試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)液中NO含量,分析NO含量變化與軟骨細(xì)胞凋亡率變化兩者的關(guān)系。(5)RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)II型膠原mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)成功建立正常大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)體系。(2)MTT及FCM分析顯示軟骨細(xì)胞處于G0/G1期的百分比減少,S及G2/M期的百分比增加(P<0.05),軟骨細(xì)胞凋亡率及培養(yǎng)液中

3、NO含量顯著降低(P<0.01)。(3)RT-PCR及Western Blot結(jié)果表明:京尼平苷干預(yù)SNP誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡,可促進(jìn)軟骨細(xì)胞II型膠原mRNA表達(dá)和蛋白合成。
　　結(jié)論:京尼平苷干預(yù)SNP誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞增殖、減少NO含量與細(xì)胞凋亡率、促進(jìn)II型膠原的mRNA表達(dá)和蛋白合成,從而抑制SNP對(duì)軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用,保護(hù)軟骨細(xì)胞。本研究探討了京尼平苷對(duì)軟骨細(xì)胞增殖、凋亡及II型膠原蛋白合成的影響