佩梅病的PLP1基因突變蛋白亞細(xì)胞定位研究.pdf

1、目的
　　佩梅病（Pelizaeus-Merzbacherdisease，PMD）是一種罕見(jiàn)的X連鎖隱性遺傳病。致病基因?yàn)榈鞍字鞍?（proteolipidprotein1,PLP1）基因，位于Xp22.2。目前發(fā)現(xiàn)的能導(dǎo)致PMD的PLP1突變包括重復(fù)突變、點(diǎn)突變和缺失突變，不同類(lèi)型突變致病機(jī)制不同，均可引起少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘形成障礙。本實(shí)驗(yàn)揭示了從中國(guó)PMD患兒中發(fā)現(xiàn)的八個(gè)PLP1錯(cuò)義突變的蛋白亞細(xì)胞定位改

2、變，并對(duì)其致病機(jī)制進(jìn)行了闡述。
　　方法
　　用分子克隆的方法構(gòu)建尚未報(bào)道的三個(gè)點(diǎn)突變：c.96C>G(p.F32L)、c.614G>A(p.R205K)、c.623G>A(p.G208D)突變體質(zhì)粒，然后應(yīng)用化學(xué)轉(zhuǎn)染方法以脂質(zhì)體Lip2000，將新構(gòu)建成功的三個(gè)突變型質(zhì)粒、野生型質(zhì)粒、實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建成功的五個(gè)突變型質(zhì)粒及對(duì)照用滅菌水轉(zhuǎn)染人少突膠質(zhì)細(xì)胞系MO3.13，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察野生型PLP1蛋白及突變PLP1蛋白

3、的亞細(xì)胞定位。
　　結(jié)果
　　成功構(gòu)建三個(gè)突變型質(zhì)粒；激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察：野生型PLP1蛋白幾乎完全表達(dá)在細(xì)胞膜上，其在膜上的表達(dá)率約為98％；不同的PLP1點(diǎn)突變使其編碼的蛋白不同程度的蓄積在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，突變蛋白F237V、T156I、G208D、R205K絕大部分蓄積在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中（蓄積率分別為97.6%、96.5%、97.1%、91.7%)；而突變蛋白P216S、T118R、T32R、P173S在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中有中度的蓄積(蓄