OPG在腹主動脈瘤中的表達及OPG與主動脈平滑肌細胞凋亡關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　 檢測OPG(骨保護素)在不同直徑大小人腹主動脈瘤(AAA)組織中的表達情況，探討其在腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　 方法：
　　 (1)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測20例AAA組織(包括6例小腹主動脈瘤(SAAA)：橫徑4.0～5.5cm，6例中腹主動脈瘤(MAAA)：橫徑5.5～7.0cm，4例大腹主動脈瘤(LAAA)：橫徑≥7.0cm，4例破裂型腹主動脈瘤(RAAA)和對照組6例正常腹主動脈

2、組織OPG的表達。
　　 (2)Western-blooting和RT—PCR技術(shù)檢測不同直徑大小瘤體中OPG，MMP-9蛋白及mRNA表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與正常腹主動脈對照，AAA組織中OPG的陽性細胞明顯增多，主要分布于中膜，并與炎性細胞浸潤程度呈顯著正相關(guān)，AAA組中OPG的表達明顯高于對照組，差異具有顯著性(P<0.05)。
　　 (2) OPG的蛋白及mRNA表達在AAA組明顯

3、高于正常腹主動脈，差異具有顯著性(P<0.05)，且與MMP-9表達及瘤體直徑呈顯著正相關(guān)。
　　 結(jié)論：OPG水平與AAA有關(guān)，OPG可能通過促進基質(zhì)金屬蛋白酶的表達和炎癥細胞浸潤，在基質(zhì)和細胞水平參與腹主動脈結(jié)構(gòu)損傷與重構(gòu)，促進AAA形成和發(fā)展。
　　 目的觀察兔體內(nèi)主動脈壁剪切力變化情況下動脈成瘤的形態(tài)學(xué)變化及OPG的表達情況及其與中膜血管平滑肌細胞(VSMCs)密度降低的關(guān)系。
　　 方法取新西蘭兔共24

4、只，在腎動脈平面以下2cm將供體的一段腹主動脈壁作補片移植到受體腹主動脈而成瘤，分別在術(shù)后7，21，35天獲取瘤體及腹主動脈組織標本，分別測量術(shù)前及成瘤后腹主動脈的形態(tài)學(xué)參數(shù)，免疫組織化學(xué)法檢測OPG抗原的表達，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)檢測OPG、MMP-9的mRNA表達，Westernblot檢測OPG、MMP-9的蛋白產(chǎn)物表達，原位末端DNA標記技術(shù)(TUNEL)測定中膜VSMCs凋亡的變化；計算機圖像分析并計算VS

5、MCs密度及平均光密度。
　　 結(jié)果實驗組兔存活15只，腹主動脈血流通暢，無吻合口狹窄，實驗組腹主動脈直徑隨時間延長逐漸擴張，與對照組有顯著差異(P<0.05)；HE染色顯示明顯增生的內(nèi)外膜存在大量免疫炎性細胞浸潤，中膜明顯變薄，平滑肌細胞排列紊亂，密度明顯降低。特殊染色可見中膜彈力蛋白明顯纖細，僵硬，平滑肌層明顯變薄，計算機圖像進一步分析顯示，瘤體內(nèi)外徑隨時間延長逐步增加，彈力蛋白、膠原纖維含量與外徑呈顯著負相關(guān)(P<0.05

6、)；免疫組織化學(xué)染色顯示實驗組OPG表達顯著高于對照組(P<0.05)，且表達水平與瘤體大小成正比。Western免疫印跡及RT—PCR結(jié)果顯示OPG、MMP-9的蛋白及mRNA表達呈陽性，且隨瘤體直徑擴大而表達逐漸增強，而正常對照組無明顯的陽性條帶。TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)，實驗組凋亡細胞明顯高于對照組，其中陽性VSMCs凋亡占35％以上，與瘤體外徑呈顯著正相關(guān)。
　　 結(jié)論1血管補片法構(gòu)建的AAA是一種穩(wěn)定可靠的動物模型，適用于A

7、AA發(fā)病機制及防治的體內(nèi)研究。
　　 2動脈壁剪切力變化可以引起局部OPG，MMP-9表達增加及VSMCs凋亡增加。
　　 3 OPG表達與VSMCs凋亡具有相關(guān)性，可能對動脈瘤形成起著一定的作用。
　　 目的：利用OPG基因過表達及RNA干擾技術(shù)作用于人主動脈血管平滑肌細胞(VSMCs)，觀察VSMCs凋亡的情況。
　　 方法：①實驗材料：購買OPG基因，同時體外化學(xué)合成4條OPG序列特異性小干擾RNA

8、(small interfering RNA，siRNA)。②實驗方法：將購買的OPG基因亞克隆至穿梭載體上，同時隨機選擇一條shRNA，構(gòu)建shRNA真核表達載體，包裝腺病毒，轉(zhuǎn)染人主動脈VSMCs。③實驗分組：分為空白組、OPG過表達組、OPG過表達+RNA干擾組。④實驗評估：應(yīng)用RT—PCR，Western blot檢測OPG基因表達的變化；應(yīng)用流式細胞儀檢測VSMCs凋亡情況。
　　 結(jié)果：①空白細胞組中，OPG表達量比