藍光誘導大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞復制衰老動物模型的實驗研究.pdf

1、目的：觀察不同藍光光照強度和光照時間對大鼠視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞復制衰老過程中衰老相關-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)的表達情況，探討藍光照射與復制衰老之間的關系，建立復制衰老的動物模型，為進一步探討RPE細胞衰老及研究老年性黃斑變性(AMD)等年齡相關性疾病提供可應用的動物模型。 方法：1.Wistal大鼠36只，鼠齡12-14周，雌雄不限，均經(jīng)檢眼鏡、裂隙燈檢查后無眼部疾病。將大鼠置于懸有波長為450±10nm的醫(yī)

2、用藍光燈管的自制光照架中。隨機分成4組，每組9只，1組為暗環(huán)境組，2組為自然環(huán)境組(光照度為50±10lux)，3組為500lux照射組(光照強度500±100lux)，4組為10001ux光照組(光照強度為1000±200lux)，每組按照照射時間再分為A(1月組)、B(2月組)、C(3月組)三個亞組，分別在1、2、3個月時行10％水合氯醛腹腔注射麻醉。2.取出眼球，將右眼球行石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察RPE細胞的變化情況。左眼球

3、行冰凍切片，利用SA-β-Gal染色方法觀察RPE細胞染色陽性情況。連續(xù)冠狀切片后，每只眼球選取2張完整視網(wǎng)膜結構SA-β-Gal染色切片，每張切片隨機選取5個視野(×200倍)，計數(shù)每個視野中陽性細胞的個數(shù)。3.運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，對單一光照組或單一時間點數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，對不同光照組不同時間點數(shù)據(jù)采用兩因素方差分析，并用SNK檢驗進行各組間兩兩比較，雙側檢驗，P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。 結果：1.HE染

4、色：1組和2組大鼠視網(wǎng)膜無明顯改變，表現(xiàn)為層次結構整齊分明，光感受器細胞內外節(jié)形態(tài)規(guī)整，內外核層細胞核染色深紫，染色均勻，RPE細胞核呈淡紫色，扁橢圓形，邊界清晰，染色均勻。3組與1組相比，表現(xiàn)為細胞結構層次紊亂，視網(wǎng)膜外層組織萎縮變薄，包括視桿視錐細胞消失，外核層變薄，數(shù)目減少，外叢狀層變薄消失，使得外核層與內核層細胞呈并行排列。RPE細胞腫脹變圓，染色變淡，但數(shù)量無明顯改變。4組大鼠視網(wǎng)膜與3組相比病理學改變基本相以，但程度更深，表

5、現(xiàn)更明顯?？梢娨晽U視錐細胞大部分消失，RPE細胞腫脹成球形，數(shù)量無明顯改變。2.SA-β-Gal染色不同光照強度和不同光照時間段，對于大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色的復制衰老表現(xiàn)不盡相同，經(jīng)方差齊性檢驗方差齊，呈正態(tài)分布。在不同光照強度和不同光照時間條件下經(jīng)雙因素方差分析，不同光照強度組大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色陽性細胞個數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(p=0.000)，尚可認為各光照強度組大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色陽性細胞個數(shù)

6、不同；不同光照時間組大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色陽性細胞個數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(p=0。000)，尚可認為各時間組大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色陽性細胞個數(shù)不同。進一步用SNK法行各組兩兩比較，除1組、2組之間大鼠RPE細胞SA—β—Gal染色陽性細胞個數(shù)差異沒有統(tǒng)計學意義外(p=0.154)，其它各組之間差異均有統(tǒng)計學意義(p=0.000)。在單一光照強度條件下，經(jīng)單因素方差分析，除1組大鼠RPE細胞SA—β—Gal染色陽性細

7、胞個數(shù)差異無統(tǒng)計學意義外(P=0.897)，其余各組差異均有統(tǒng)計學意義，進一步行SNK法檢驗，除1組A與B、B與C組之間(P1=0.687，P2=1.000)，2組A與B組之間(p=0.406)大鼠RPE細胞SA-β-Gal染色陽性細胞個數(shù)差異無統(tǒng)計學意義外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。在單一時間條件下，經(jīng)單因素方差分析，各組差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。進一步經(jīng)SNK法檢驗，除各時間段*與＃組相比大鼠RPE