基于定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究OLFM4在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：胃癌是危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，名列全球第五大常見(jiàn)腫瘤。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，全球每年新發(fā)病例約95萬(wàn)人，死亡約72萬(wàn)人。胃癌病人的預(yù)后與腫瘤分期密切相關(guān)，而腫瘤的分期與腫瘤浸潤(rùn)深度、局部淋巴結(jié)和遠(yuǎn)端臟器是否轉(zhuǎn)移相關(guān)。目前胃癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確。因此深入研究胃癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移機(jī)制顯得尤為重要。近年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展為我們研究疾病的發(fā)病機(jī)制提供了強(qiáng)有力的工具。本研究旨在運(yùn)用同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)（iTRAQ）尋找

2、與胃癌發(fā)病相關(guān)的蛋白，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　方法：本研究運(yùn)用iTRAQ技術(shù)對(duì)胃癌組織和癌旁組織進(jìn)行定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，收集15例胃癌病人的胃癌組織和癌旁組織，通過(guò)iTRAQ篩選出胃癌組織和癌旁組織中差異表達(dá)的蛋白分子。從篩選出的蛋白分子中進(jìn)一步選出幾個(gè)蛋白，運(yùn)用免疫印跡、實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證在蛋白水平、RNA水平差異蛋白的表達(dá)情況，并且用組織芯片進(jìn)行免疫組化染色在組織水平驗(yàn)證差異蛋白的表達(dá)。然后運(yùn)用胃癌細(xì)胞株模型，

3、利用小干擾RNA技術(shù)特異性的下調(diào)蛋白的表達(dá)后觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果：通過(guò)iTRAQ技術(shù)以及質(zhì)譜分析，共篩選出了134個(gè)差異表達(dá)的蛋白，其中51個(gè)蛋白上調(diào)，83個(gè)蛋白下調(diào)。通過(guò)免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證了AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1等差異蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn) AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1在胃癌組織的表達(dá)明顯高于癌旁組織，免疫組化檢測(cè)也有同樣的結(jié)果。結(jié)果與iTRAQ結(jié)果一致。從差異蛋白中篩

4、選出 OLFM4進(jìn)行下一步的研究，在兩株胃癌細(xì)胞AGS、MKN28中通過(guò)小干擾RNA技術(shù)下調(diào)胃癌細(xì)胞株中OLFM4的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞株中OLFM4的表達(dá)下調(diào)后，胃癌細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)能力，遷移和侵襲能力均明顯降低。
　　結(jié)論：本研究成功的運(yùn)用了定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選胃癌組織與癌旁組織中差異表達(dá)的蛋白，通過(guò)進(jìn)一步的驗(yàn)證表明iTRAQ技術(shù)的結(jié)果是可靠的。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)的OLFM4在胃癌的發(fā)病和轉(zhuǎn)移過(guò)程可能起了一定的促進(jìn)作用，而降低